双生病毒及伴随小分子DNA的基因组结构与变异研究

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1、浙江大学博士学位论文双生病毒及伴随小分子DNA的基因组结构与变异研究姓名：谢艳申请学位级别：博士专业：植物病理学指导教师：周雪平2003.5.1浙江大学博士学位论文双生病毒及伴随小分±!坠叁璺垒丝堕塑墨鱼塞致谢本论文是在导师周雪平教授的精心指导下完成的。周老师学识渊博、治学严谨、才思敏捷、诲人不倦，在论文的整个研究过程中，自始至终地给予我无私的关怀和热情的指引，他扎实的专业知识、刻苦勤奋的工作作风、清晰有序的科研思路、孜孜不倦的探索精神和严格务实的生活态度更值得我终生效仿。在此谨向导师表示我最诚挚的感谢和敬重之情。我要感谢实验室的李桂新老师

2、，她豁达平易的处世态度给了我很多的启迪，在学习和生活上对我的关心照顾使我终身受益。我还要特别感谢同一战壕的陶小荣、吴佩君、李正和、崔晓峰、马新颖、范三微、张弦、王贵珍、钱亚娟、青玲等同学，在实验设计、进展过程中给予我太多的帮助和支持。生物所病毒室已毕业的戚益军、薛朝阳、李凡、陈青、温瑞、蒋军喜等师兄师姐们，在读的于翠、牛颜冰、江彤、张凯、熊庆、关翠萍、李云琴、郭维、杨松等师弟师妹们及在职的王向阳老师、吴根福老师和施曼玲老师，单抗实验室的吴建祥老师和陈正贤老师都给予了我极大鼓励和帮助，同他们的融洽相处为我的学习生活增添了许多亮丽的色彩，使我能

3、以一种轻松、愉快的心情投身科研，忙而有序地完成论文工作．在此向生物所所有给予我帮助的热心的老师和同学们表示衷心的感谢和良好的祝愿．在读期间，与同窗好友刘梅、梁岩、王贞萍的心灵交流激励着我不断进取，在衷心感谢他们的同时，我将百倍珍惜这来之不易的缘分与友谊，让友谊之树常青．值此论文交付之际，谨向所有为我营造良好学习、生活氛围和提供热情帮助的老师、同学、朋友们致以最诚挚的感谢!最后，我要向深爱我的父母、小妹及男友钟世华先生表示深深的谢意，是他们始终如一的关环，理解和支持使我顺利完成学业。浙江大学博士学位论文双生病毒及伴随小分-tDSa基咝楚塑皂壅

4、墨!堕摘要双生病毒在世界范围内广泛发生，并已在多种作物上造成毁灭性危害。我国对粉虱传双生病毒种类、病毒基因组结构及变异进化等尚没有深入研究，为此我们首先对云南省的双生病毒样本开展了研究。从云南烟草、番茄、南瓜上采集了144个双生病毒样本，在利用单克隆抗体进行TAS．ELISA检测病毒表位抗原型基础上，测定了15个病毒分离物的全基因组DNA．A序列。全基因组DNA．A序列分析表明，其中三种为双生病毒新种，分别命名为：云南烟草曲叶病毒(TobaccoleafcurlYunnnavirus，TbLCYNV)、烟草曲茎病毒(Tobaccocurly

5、shootvirus，TbCSV)、云南南瓜曲叶病毒(SquashleafcurlYunnanvirus，SLCYV)；另一种为中国番茄黄化曲叶病毒(TomatoyellowleafcurlChinal巧rus，TYLCCNV)。其中，SLCYV是由泰国番茄黄化曲叶病毒(TomatoyellowleafcurlThailandvh'us,TYLCTHV)、孟加拉胡椒曲叶病毒(PepperleafcurlBangladeshvirus，PepLCBV)及另～未知病毒重组后形成的。对TYLCCNV各分离物DNA．A的变异研究表明，其变异主要集中

6、在ACl～Ac4编码区。从烟草曲茎病毒Y2分离物中发现了缺陷干扰型DNA分子。小分子DNA只有DNA—A的一半大小，是TbCSVDNA—A缺失后形成的。小分子DNA具有完整的AV2、AC40RF和IR区，并保留了部分ACl和AVl基因，还存在新的ORFs。免疫捕获PCR证明小分子DNA是由辅助病毒的粒子包裹。小分子DNA与TbCSV一起可以通过嫁接或烟粉虱传播。从烟草曲茎病毒、中国番茄黄化曲叶病毒及赛葵黄脉病毒(Malvastrumyellowveinvirus，MYVV)中发现了新型卫星DNA分子——DNA0。DNAB分子大小为DNA—A

7、的一半，除茎环结构和TAATA．丌AC外，与辅助病毒基因组序列没有同源性。DNAB含有115nt的保守序列，230nt左右的A．rich区，互补链编码一个118aa的ORr(C1)。经免疫捕获PCR及粉虱传毒实验表明，DNAB分子包裹在双生病毒粒子中，并伴随病毒由烟粉虱传播。对18个与中国粉虱传双生病毒伴随的DNAl3分子的全基因组序列分析比较表明，18个DNA0分子的同源性为39～99％，可分成三类，分别与TbCSV、TYLCCNV及MYVV相伴随。TYLCCNV各分离物DNAB的同源性为72～99％，TbCSV各分离物DNAB的堂’江叁

8、兰堡主兰堡垒圭翌圭墨圭垦堡堕：!：坌±!坠叁里塾竺苎兰墨墨堕墨同源性为83～98％，TYLCCNVB和TbCSV0的同源性只有52～57％，MYVVB与TYLCCNVl3和TbC