皮胶原蛋白的性质、组成及应用研究

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1、密级：公开中图分类号；TS254◎膨炉z角矢乎硕士学位论文论文题目：艇避鱼匝腔返蛋自曲。眭厦：组成星座周皿宜作者姓名：————主盘垒———一学科专业坐芒墨韭墨焦壁煎兰焦研究方向：坐芒坐生生坐芒壶童垒指导教师墼堑熬撞提交日期：二00九年一月浙江工商大学硕士学位论文鲅觫鱼皮胶原蛋白的性质、组成及应用研究摘要觖觫鱼(Lophiuslitulon)属冷温性底层鱼类，分布于北太平洋西部，我国产于东海北部、黄海及渤海。在鲅觫鱼的加工中，大量鱼皮被作为下脚料而废弃。胶原蛋白是一种重要的结构蛋白，广泛分布于结缔组织、皮肤

2、、骨骼等，起着支撑器官、保护机体的功能，是决定结缔组织韧性的主要因素。由于其天然的低毒性、低免疫原性、生物降解性、营养性、保湿性而广泛地应用于食品、化妆品、生物医学材料等领域。本文从簌鲸鱼皮中提取胶原蛋白，并对其理化性质、组成及应用进行了研究，为触觫鱼皮胶原蛋白的利用与开发提供理论依据。采用酸提法和酶提法从艘觫鱼皮中提取胶原蛋白，并用酸提法从鲫鱼皮、黑鱼皮、鲳鱼皮、猪皮中提取胶原蛋白，以进行对比研究。酸提前鲛觫鱼皮用7．5％(w／v)的NaCI溶液去除杂蛋白，用10％丁醇除脂。处理过的鱼皮用O．5M的醋酸

3、溶液提取酸溶性胶原蛋白(ASC)，提取率为35．5％。提取过ASC的触艨鱼皮残渣蒸馏水冲洗至中性，继续用2．5％木瓜蛋白酶提取酶溶性胶原蛋白(PSC)，提取率为15．5％。提取得到的ASC和PSC用盐析、复溶和透析的方法进行纯化得到纯胶原蛋白。浙江工商大学硕士学位论文触觫鱼皮胶原蛋白的理化性质研究包括溶解度、粘度和热变性温度的测定，并与其它来源的胶原蛋白进行比较。胺鲸鱼皮胶原和其它来源胶原的溶解度均在pH3附近时最大，pH7时最小。当NaCI浓度达到2％(w／v)时，对触鲸鱼皮和其它来源胶原蛋白的溶解度产

4、生影响，随着NaCl浓度的继续升高，溶解度急剧下降。觖觫鱼皮胶原蛋白和其它来源胶原的粘度随着温度的升高而减小，在某一温度附近粘度下降速度加快，但不同来源胶原蛋白的变化起始温度不同。采用示差扫描量热法测得艘觫鱼皮胶原蛋白的热变性温度为22．09℃，与同是海水鱼来源的鲳鱼皮胶原蛋白热变性温度(21．91℃)接近；而淡水鱼来源的鲫鱼皮胶原和黑鱼皮胶原热变性温度稍高，分别为28．38℃和28．73。C；陆生来源的猪皮胶原和牛跟腱胶原热变性温度最高，分别为38．91℃和38．10。C。结果表明胶原蛋白的热变性温度与

5、来源动物的物种、生长环境有关，哺乳动物的高于鱼类，其中淡水鱼的又高于海水鱼。采用SDS．PAGE法分析鲛觫鱼皮胶原蛋白和其它几种来源胶原的亚基组成和胶原类型。电泳结果显示：艘觫鱼皮ASC和PSC均为电泳纯；ASC由两条0【l链和一条0【2链组成，是典型的I型胶原蛋白；其它来源的ASC也是I型胶原蛋白。觖觫鱼皮PSC0【、p链的分子量比ASC的小，比较所有胶原蛋白的0c链分子量发现，陆生动物来源的胶原蛋白分子量比鱼胶原的大，淡水鱼的分子量比海水鱼的大，表现出显著的来源差异性。采用HPLC柱前衍生法分析簌觫鱼

6、皮胶原蛋白和其它几种来源II浙江工商大学硕士学位论文胶原的氨基酸组成。触觫鱼皮ASC的甘氨酸(Gly)含量很高，占总氨基酸的40％。簌觫鱼皮ASC的脯氨酸(Pro)和羟脯氨酸(HyP)、赖氨酸(Lys)和羟赖氨酸(HyL)的含量分别占总氨基酸的14．69％、2．66％，Pro和Lys的羟基化程度为28．43％，均比其它来源胶原蛋白的低。比较胶原蛋白中与热稳定性相关的氨基酸(Pro、HyP、Lys、HyL)发现，其含量与胶原的热变性温度表现一致，陆生来源胶原的脯氨酸和赖氨酸等氨基酸含量最高，淡水鱼的次之，海

7、水鱼的最小。采用液质联用法分析簌觫鱼皮和牛跟腱胶原蛋白al、0t2链胰蛋白酶酶解产生的多肽混合物，根据二级质谱图谱推断各特征肽段的氨基酸序列。质谱结果显示，在两个物种的Q链酶解肽段中均检测到一部分共有肽段，但是伐链共有肽段的质谱裂解方式及裂解生成的片段丰度不相同。分析各肽段氨基酸序列，发现不同物种的0【，、睨链都有各自特有的肽段，这些肽段将来也许能起到胶原蛋白Q链的指示作用。目前临床上所用的胶原海绵多是来源于陆生动物胶原，本文研究了簌鲸鱼皮胶原蛋白／硫酸软骨素复合海绵的理化性质、止血能力及生物相容性，并用

8、相同方法制备的猪皮胶原蛋白／硫酸软骨素复合海绵作为对照。实验结果表明簌觫鱼皮胶原海绵和猪皮胶原海绵的理化性质结果均符合医学材料的各项要求。以胶原海绵对家兔耳部的止血时间和止血量来评定止血能力，结果发现簌鲸鱼皮胶原海绵的止血能力优于普通药棉，与猪皮胶原海绵的接近。觖觫鱼皮胶原llI浙江工商人学硕士学位论文海绵的生物相容性用细胞相容性，体内致敏反应及体外降解性来表征。细胞相容性结果显示，觖鲸鱼皮胶原海绵与细胞的亲和力强，能够促进细