薄壳山核桃SRAP标记体系优化和遗传多样性分析

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1、万方数据江苏农业学报(Jiangsu上ofAgr．＆t)，2010，26(5)：1037—10421037刘广勤，王鹏良，周蓓蓓，等．薄壳山核桃SRAP标记体系的优化和遗传多样性分析[J]．江苏农业学报，2010，26(5)：1037．1042．薄壳山核桃SRAP标记体系的优化和遗传多样性分析刘广勤1，王鹏良2，周蓓蓓1，吕智鹏2，王海燕2(1．江苏省农业科学院园艺研究所，江苏南京210014；2．南京农业大学农学院，江苏南京210095)摘要：为确立薄壳山核桃SRAP．PCR反应体系，并对薄壳山核桃品种遗传多样性进行分析，以薄壳山核桃嫩叶提取的DNA为模板，进行M92+、d

2、NTP、引物和彻DNA聚合酶4个因素3个水平[k(34)]正交试验，并比较了不同浓度模板DNA对PCR扩增效果的影响。结果显示：薄壳山核桃的SRAP-PCR最佳反应体系为M92+2．5mmol／L、dNTP0．20mmol／L、引物0．4p。mol／L、TaqDNA聚合酶1．5U。DNA模板最佳浓度为lOIlg利用最佳反应体系对薄壳山核桃进行引物组合多态性筛选，从90个引物组合中筛选出多态性引物组合39个。14个多态较高的引物组合对12个薄壳山核桃品种进行遗传多样性分析，通过PCR扩增，得到128个谱带，显示了较高的多态性，12个供试薄壳山核桃品种的遗传背景具有丰富的多样性。

3、表明SRAP标记可应用于薄壳山核桃分子生物学研究。关键词：薄壳山核桃；SRAP标记；遗传多样性中图分类号：$634．3文献标识码：A文章编号：1000-4440(2010)05-1037-06OptimizationofSRAPMarkerReactionSystemandGeneticDiversityforCaryaillinoinensisKochLIUGuang—qinl，WANGPeng．1ian92，ZHOUBei—beil，LoZhi-pen92，WANGHai—yan2(1．InstiaaeofHorticulture，JiangsuAcademyofAgri

4、culturalScience，Nanjin9210014，China；2．Collegeof^g，证诎I胛，Naming舭础z‘r耐University，Naming210095，China)Abstract：TheorthogonaldesignwasemployedtooptimizeaSRAP·PCRsystemwith4factors(Mgz+，dNTP，prim-e1"8and购polymerase)at3levels．TheeffectoftheconcentrationoftemplateDNAonPCRamplificationwascompared．The

5、optimizedSRAP—PCRsystemforCarya／／／／no／ne脚／sKochw硝：l一10xPCRbuffer，10ngtemplateDNA，2．5mmol／LM92+，0．20mmoi／LdNTP，0．4t上mol／Lprimer，and1．5UTaqDNApolymeraseinatotalof10一reactionsolution．Thirty—nineprimerpairsoutofninetywerepolymorphicbytheoptimizedSRAP-PCR．Fourteenhighlypolymorphicprimerpairsyiel

6、ded128bandsamong12peacans．showingarichgeneticdiversityinCaryaillinoinensisKoch．11leresultindica-tedthatSRAPmolecularmarkercouldbewidelyusedingeneticdiversityanalysisofCaryam打mi粥m诂Koch．Keywords：CaryaillinoinensisKoch．；SRAPmarker；geneticdiversity收稿日期：2010-02一“基金项目：中央财政林业科技推广示范基金项目(59911001)作者

7、简介：刘广勤(1965-)，男，副研究员，研究方向：薄壳山核桃等干果类品种选育与栽培。(Tel)025-84391697，13905180598；(E—mail)liuguangqin@126．eom。王鹏良为共同第一作者。通讯作者：王海燕，(7rel)025jB435344；(E—mail)hywang@nj¨．edu．cn相关序列扩增多态性(SRAP)是2001年由U和Quiros开发的一种基于PCR的新型分子标记技术‘1

8、。与RAPD、AFLP、SSR等标记方法相比，SRAP具有简单、高效、高共显