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《不同条件下Percoll密度梯度离心分离组织细胞浮游生物的比较》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、CHINJFORENSICMED2007年第22卷第3期不同条件下Percoll密度梯度离心分离组织细胞浮游生物的比较1,2111111何方刚,刘良,黄代新,杨庆恩,李小廷,尹慧,翟仙敦(1.华中科技大学同济医学院法医学系,湖北武汉430030;2.武汉大学医学院法医学教研室,湖北武汉430072)【摘要】目的实验评估不同条件下Percoll密度梯度离心分离组织中浮游生物的效果。方法大白兔肝组织匀浆后与3种藻类混合物混匀,分为混匀高速分离组、混匀低速分离组、叠加高速分离组、叠加低速分离组和未分离组(对照组)进行P
2、ercoll密度梯度离心分离浮游生物,镜检并提取其DNA,用PCR技术分别检测浮游生物16SrDNA和叶绿素基因特异性片段。结果混匀高速分离组有较多浮游生物呈分层条纹状分布于离心管中部,叠加高速分离组浮游生物紧邻组织细胞层下,低速分离组见较少浮游生物紧邻于组织细胞层之下,未分离组见浮游生物和组织细胞混杂沉于管底;经DNA检测,各分离组组织细胞层下液体均可检出浮游生物的1条447bp16SrDNA片段及1条194bp叶绿体/叶绿素脱辅基蛋白基因片段,未分离组均未检出扩增产物且背景较深。结论混匀加样方式进行高速Per
3、coll密度梯度离心,合并收集组织细胞层下所有液体,是分离浮游生物的最有效方法。【关键词】法医病理学;溺死;浮游生物;密度梯度离心;Percoll液【文献标识码】A【文章编号】1001-5728(2007)03-0153-04Acomparativeresearchonplanktonsseparatedfromliverbydifferentdensitygradientcentrifuga2△△tionwithPercollinrabbits(HEFang2gang,LIULiang,HUANGDai2xin
4、,etal./FacultyofForensicMedicine,TongjiMedicalCollegeofHuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030,China)【Abstract】ObjectiveToexperimentallyevaluatetheeffectofdifferentdensitygradientcentrifuga2tiononplanktonseparationfromtissueswithPercoll.MethodsMi
5、xtureofthreealgaespecieswiththeho2mogenateofrabbitliverweredividedinto5centrifugationgroups:well2mixedhomogenateathigh2speedcentrifugation,well2mixedhomogenateatlow2speedcentrifugation,overlayinghomogenateathigh2speedcentrifugation,overlayinghomogenateatlow2s
6、peedcentrifugation,andmixtedhomogenatecentrifugatedat12000r/minascontrolgroup.Theplanktonswereseparatedfromthemixturebydensitygradient【基金项目】国家自然科学基金资助项目(30300399)centrifugationwithPercoll.Afterseparation,the【作者简介】何方刚(1972–),男,湖北随州人,主治医师,博士,主要从事法医病理学研究。sedimen
7、tofdifferentlayerwasdetectedundermi2【通讯作者】黄代新(1969–),男,湖北松滋人,副教授,博士,croscope,andDNAwasextracted.Thespecific主要从事法医分子遗传学研究。本试验结果表明,采用气相色谱方法测定酱油中[5]邓贤勇,张涛.气相色谱法分析42甲基咪唑[J].化学世42甲基咪唑含量,操作简便、快速,定量准确,重现性界,1997,(4):213-215.好[6]WilksRA,JohnsonMW,ShinglerAJ.Animproved
8、,是酱油中有毒物质42甲基咪唑含量测定的一种可methoddeterminationof42melhylimidazolincaramelcolor行的分析方法。[J].JournalofAgriculturalandFoodChemistry,1977,25【参考文献】(3):605-608.[7]klejidusB,MorsvcovaJ,KubanV.Reversed
