液相色谱串联质谱法定量检测青花菜中L_硒甲基硒代半胱氨酸

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1、第35卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第2期2007年2月ChineseJournalofAnalyticalChemistry244～246液相色谱串联质谱法定量检测青花菜中L2硒甲基硒代半胱氨酸22231张明杜业刚林少彬杨文婕1(中国疾病预防控制中心营养与食品安全所,北京100021)2(中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所,北京100021)摘要建立了液相色谱串联质谱(LC2MS2MS)法测定青花菜中L2硒甲基硒代半胱氨酸(SeMC)含量的方法。植物样品经沸水提取,以甲醇20.1%七氟丁酸水溶液(30∶70)为流动相,滤液经WatersSymmet

2、ryC18(50mm×3.9mm,5μm)分离,经在线电喷雾离子源(ESI)正离子化后,采用多反应离子监测方式(MRM)选择m/z184.0→(167.0,94.9)测定SeMC。SeMC的线性范围为0～200mg/L,准确度在96%～114%之间,日内日间精密度(RSD)在±10%内。检出限为0.1mg/kg。结果表明:本方法高效、准确,特异性强,样品处理简单,可准确定量富硒青花菜中的SeMC。关键词L2硒甲基硒代半胱氨酸,液相色谱2串联质谱法1引言硒具有多种其它营养素不可替代的生物学功能。研究发现,人体和动物体内硒的吸收、作用效果和[1]毒性等与摄入硒的化学形态密切相关

3、。L2硒甲基硒代半胱氨酸(SeMC)是比硒蛋氨酸(SeMet)和亚硒酸[2,3][5]钠具有更高生物活性的一种小分子有机含硒化合物,可通过诱导细胞凋亡等机制发挥抑癌作用。近年来,多种现代分析技术被尝试用于富硒生物样品中含硒化合物的鉴定和定量分析,最值得推荐[5][6]的是液相色谱质谱联用技术,具有灵敏度高,专属性好,分析速度快等特点。Finley等已运用ICP2MS技术证实富硒青花菜含有SeMC。本研究拟建立测定富硒青花菜中SeMC的液相色谱串联质谱法(LC2MS2MS),并通过方法学考察,以获得高效、准确、特异性和实用强性的定量检测富硒青花菜中SeMC的分析技术。2实验部

4、分2.1仪器与试剂1100高效液相色谱系统(美国安捷伦公司);API4000三级四极串联质谱仪(美国应用生物系统公司);MettlerAE163万分之一分析天平(美国MettlerToledo);VORTEX2TGENIE涡流混匀器(scientificindustry);Barnstead纯水机;acrodisc25mmsyringe0.2μm过滤器(美国Pall公司);电子恒温浴锅。甲醇为色谱纯(美国Fisher公司);99%七氟丁酸(Lancaster公司)。CH32Se2CH22CH(NH2)2COOHSeMC(美国PharmacySe公司)。实验用水由Barnst

5、ead纯水系统制备。2.2样品处理市购普通青花菜,富硒青花菜采自我国高硒地区,经洗净、阴干、切碎、60℃烘干后,研磨,过0.16mm筛,采用2,32二氨基萘荧光分光光度法测定这两种青花菜总硒含量分别为13和320mg/kg。准确称取0.1g样品于50mL具塞离心管中,加入5mL18.2MΩcm的纯水,沸水浴加热提取1h,期间,每隔20min涡流混匀一次。提取液室温放置自然冷却,用0.2μm滤器过滤。2.3液相色谱、质谱条件WatersSymmetryC18色谱柱(150mm×3.9mmi.d.,5μm),柱温20℃。流动相:甲醇20.1%七氟丁2006205206收稿;20

6、06210220接受本文系国家自然科学基金(No.30471454)资助项目3E2mail:wenjy6@126.com第2期张明等:液相色谱串联质谱法定量检测青花菜中L2硒甲基硒代半胱氨酸245酸水溶液(30∶70,V/V)。流速:500μL/min;进样量为10μL。ESI离子源,正离子电离方式,电离电压5500V;雾化气:高纯氮气;碰撞活化(CAD)参数为6;气帘气(CUR)20psig;雾化气(GS1)35psig,辅助气(GS2)40psig;离子源温度(TEM):450℃;扫描方式:多反应离子监测(MRM)。3结果与讨论3.1提取方法的比较及流动相的选择比较水、

7、甲醇、丙酮和二氯甲烷等溶剂对青花菜中SeMC的提取效率。由于纯水提取效率较高,实验选择纯水作为提取溶剂。实验发现,沸水浴加热提取优于常温超声方法。考察不同比例的甲醇水溶液(70%、50%、30%和20%)作流动相的情况,比较发现,在30%甲醇条件下,SeMC在样品中与杂蜂分离较好,但峰形存在拖尾现象。流动相中添加了少量七氟丁酸,峰形有较好改善。综合考虑分离效果、分离时间,选择甲醇20.1%七氟丁酸水溶液(30∶70,V/V)为流动相。3.2色谱质谱行为首先经Q1全扫描选择母离子,然后进行二级质谱扫描,得到化合物的二