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《氯霉素全抗原合成及多克隆抗体的制备_何方洋》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国兽医科技第33卷第3期2003年51内的消毒和卫生,病情基本得到了控制。情况及其防治[J].中国畜禽传染病,1987,4.3各年龄猪均可感染猪胸膜肺炎放线杆菌,3月(5):62263.龄猪最易感。本病多发于每年的4～5月或9～11[2]任光澄.猪嗜血杆菌病[J].畜牧与兽医,月,具有明显的季节性,应激因素亦可引起发病,如1981,(6):26229.饲养环境突然改变、密集饲养、通风不良、气候突变[3]朱士盛,蔡卫端,杜华宏,等.进口猪嗜血杆菌及长途运输等。本次送检猪场的猪所以发病,据调胸膜肺炎血清学调查[J].中
2、国畜禽传染病,查是由于猪群改变环境,太过密集饲养所造成的。1988,(1):31232.[4]曹澍泽,郭玉璞,刘尚高,等.兽医微生物学及参考文献:免疫学技术[M].北京:北京农业大学出版[1]冯学平,李通瑞.猪嗜血杆菌胸膜肺炎的流行社,1992.49250.氯霉素全抗原合成及多克隆抗体的制备何方洋,冯才伟,张航(北京望尔生物技术有限公司,北京100094)摘要:用重氮化方法将氯霉素与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原和包被抗原,用ELISA方法进行鉴定。将偶联抗原用弗氏佐剂乳化后免疫德国大白
3、兔,制备多克隆抗体,并用硫酸铵沉淀法初步纯化,用亲和层析法进一步纯化。用所得抗体建立竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)用于氯霉素检测,最低检查限为0.3ng/mL。关键词:氯霉素;抗原合成;多克隆抗体;酶联免疫吸附分析法中图分类号:S859.796文献标识码:B文章编号:100026419(2003)0320051204氯霉素(Chloramphenicol,CAP)是应用广泛的疫兔制备多克隆抗体,采用ELISA方法对氯霉素的抗生素,对畜禽疾病的控制和治疗发挥了重要作用。残留限量进行了初步测定。但由于氯霉素存在严重
4、的副作用,能引起人的再生1材料和方法障碍性贫血、粒细胞缺乏症等疾病,欧美等发达国家[1]1.1试剂已相继禁止或严禁使用。我国农牧发[2001]24号文规定,在马肝、鸡肉、真鲷肌肉中的氯霉素残留牛血清白蛋白(BSA):纯度大于99%,SigmaA2限量为不得检出。用ELISA和高效液相色谱分析7638;卵清蛋白(OVA):纯度大于90%,SigmaA2法(HPLC)检测氯霉素,要求其检查限为1ng/g[2],5378;抗氯霉素抗体:SigmaC21168;氯霉素:加之高效液相色谱分析法和气谱、色谱等仪器分析boehri
5、nger634433;四甲基联苯胺(TMB):华美生物方法样本前处理及其测定过程操作繁琐,费用高,不工程公司产品;辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗鼠适于大量样本筛查。而ELISA方法具有灵敏度高,IgG:进口分装。其他试剂均为分析纯。特异性强,仪器设备要求低和样本前处理相对简单1.2缓冲液等优点,适于现场监控和大量样本筛查。本研究用包被缓冲液(0.05mol/L、pH9.6的碳酸盐缓重氮化方法将氯霉素与牛血清白蛋白(BSA)和卵清冲液):Na2CO31.59g,NaHCO32.93g,加蒸馏水至蛋白(OVA)偶联制备
6、免疫抗原和包被抗原,将其免1000mL;封闭液:含10g/L明胶0.05mol/L、pH9.6的碳酸盐缓冲液;0.01mol/L磷酸缓冲液收稿日期:2002208209(PBS):pH7.4,NaCl8.00g,KCl0.20g,KH2PO4作者简介:何方洋(1969),男,贵州省凤冈县人,总工0.20g,Na2HPO4·12H2O2.90g,加入蒸馏水至程师,硕士。1000mL;洗涤缓冲液(PBST):含0.5mL/L52ChineseJournalofVeterinaryScienceandTechnologyV
7、ol.33No.32003Tween220的0.01mol/L、pH7.4的PBS;抗体及酶标准品有显色反应(因所购抗体是用BSA偶联物免稀释液:含0.01mL/LTween220和1g/L明胶的疫制备的),但对含氯霉素的标准品则无抑制;OVA0.01mol/L、pH7.4的PBS;终止液(2mol/LH2或CAP包被孔对0标准品无显色反应,对其他浓度SO4):取蒸馏水177.8mL,加浓硫酸(体积分数氯霉素标准品无抑制。98%)22.2mL;底物缓冲液(pH5.0的磷酸2柠檬酸1.5多克隆抗体的制备缓冲液):0.2
8、mol/LNa2HPO4(28.4g/L)25.7mL,1.5.1取1mg/mL(以载体蛋白含量计算,以下0.1mol/L柠檬酸(19.2g/L)24.3mL,加蒸馏水50同)BSA2CAP或OVA2CAP全抗原1.5mL,加入等mL;TMB底物使用液:TMB储存液(10mgTMB量弗氏完全佐剂,充分乳化后,经皮下注射给3只体溶于4mL乙二醇中
