院感细菌培养操作

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1、1.目的:医院是病原微生物较集中,抵抗力低的人群密集的地方,加之化疗、放疗等手段的采用，影响病人免疫机能下降，大量使用抗生素，引起耐药菌株增多，菌群失调，以及先进医疗仪器广泛应用等原因，增加消毒灭菌的难度，致使院内感染已成为当前医疗实践的严重障碍，直接影响医疗效果。进一步规范院内感染监测标本的程序，更好、更快检测病原微生物的生长情况，预防医院感染的发生。2.设备、试剂与材料2.1VITEK2compact鉴定药敏分析系统2.2VITEK32鉴定药敏分析系统2.3美国FORMAⅡ级生物安全柜2.4显微镜2.5酒精灯2.6接种环2.7恒温培养箱2.8各种培养基2.9革兰

2、氏染色液2.10触酶试剂2.11氧化酶试剂2.12移液器2.13无菌吸嘴3.院感标本采集3．1空气的采样3．1．1采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。3．1．2采样高度与地面垂直高度80-150CM。3．1．3布点方法室内面积＜30m2，设一条对角线上取三点，即中心一点，两端各距墙1m处各取一点；室内面积＞30m2，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。3．1．4采样方法用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检。3．2物体表面采样3．2．1采样时间选择消毒处理后4小时内进行采样。3．2．2采样面积被采表面＜100cm2

3、，取全部表面；被采表面＞100cm2，则取100cm2。3．2．3采样方法用5×5cm2的标准来灭菌规格板，放在被检物体表面，用无菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1-4个规格板面积，剪支手接触部位，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。3．3医护人员手采样编写谭南审核袁春雷批准王冬娥3．3．1采样时间在接触病人、从事医疗活动前进行采样。3．3．2采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一枝在双手指曲面

4、从指跟到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米（cm2）计算。3．4医疗用品采样3．4．1采样时间在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。3．4．2采样方法右用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器和注射针等，取其中的一部分放培养液中培养。对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品，可用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。3．5使用中消毒剂的采集3．5．1采样时间

5、采取使用中的消毒剂。3．5．2采样方法在无菌条件下，用无菌注射器抽取1ml被检样品，加入10ml稀释液混匀。（对于醇类与酚类消毒剂稀释液用灭菌生长盐水；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入0.1%硫代硫酸钠；对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入3%（w/v）吐温80和0.3%卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入3%（w/v）吐温80，以中和被检样液的残效作用。）3．6内镜的采样3．6．1咽喉镜、支纤镜用10ml戊二醛中和液冲洗内镜后，送检实验室

6、。3．6．2胃镜、消化镜、宫腔镜用10ml0.1%硫代硫酸钠中和液冲洗内镜后，送检实验室。3．6．3鼻咽镜、过氧化氢消毒的腔镜类用10ml生理盐水中和液冲洗内镜后，送检实验室。3．7透析液的采样用灭菌的空试管取透析液10ml送检。1.院感标本的运送及交接签收4．1标本的采集4．1．1空气标本的采集由临床科室负责完成，标本采集完毕，由临床各科在规定的时间内将标本安全送回实验室。4．1．2物体表面、医务人员手、消毒剂、内镜等由院感科负责组织采样，在规定时间内将标本安全送达实验室。4．2采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6小时，若样品保存于0-4℃条

7、件时，送检时间不得超过24小时。4．3标本收回实验室后,将标本的信息登记在“院感监测登记本”上。4．4微生物室工作人员的验收根据微生物室院感标本拒收标准进行检查编写谭南审核袁春雷批准王冬娥，对不符合要求的，将拒收，立即退回给送检人员，指出问题，告知标本重取，所有拒收标本均需在《标本拒收记录本》上登记。拒收情况如下：4．4．1空气培养平板数目击者不正确（房间小于30平方米做3个平板培养，房间大于30平方米做5个平板培养）。4．4．2未注明标本采集科别、来源和培养目的。4．4．3标本明显受污染。1.检测步骤见本文件末面流程图5．1空气标本的检测5．1．1细菌室收到标