DNA提取与鉴定

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1、DNA的粗提取与鉴定构成生物体的遗传物质是什么？讨论１：构成生物体的遗传物质是什么？怎样才能将细胞内的遗传物质分离出来？讨论2：讨论１：基础知识提取DNA的方法提取DNA的方法基础知识1.提取DNA的基本思路利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。2.DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反。①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度

2、最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而　　　　　　　　逐渐降低;在0.14mol/L时，DNA溶解度最小；　　　　　　　　当NaCl溶液浓度继续增　　　　　　　　加时，DNA的溶解度又　　　　　　　　逐渐增大。②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？0溶解度NaCl浓度0.1

3、4mol/L2mol/L②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？当氯化钠的物质的量浓度为2mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为0.14mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。3.DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。4.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性4.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响4.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①

4、蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性4.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响5.DNA的鉴定5.DNA的鉴定①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二笨胺可以作为鉴定DNA的试剂。5.DNA的鉴定①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二笨胺可以作为鉴定DNA的试剂。②甲

5、基绿（蓝绿色）通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。原理总结（一）实验材料的选取实验设计1.材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体中培养基的培养的大肠杆菌。（从中选取2~3种实验材料）2.原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1.动物细胞动物细胞

6、的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。讨论为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？讨论为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA。①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜2.植物细胞讨论加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？讨论加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放

7、；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜2.植物细胞②实例：　　提取菜花DNA时，在切碎的菜花中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液.(洋葱也行)讨论如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？讨论如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状淀淀物、用二笨胺鉴定不显示蓝色等。（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理。（三）去除

8、滤液中的杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理。讨论此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？（三）去除滤液中的杂质答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理。讨论此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同，通过控