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1、鸡蛋中溶菌酶的提取，纯化及纯度鉴定 李莹姝 蒋华云*（南京师范大学生命科学学院，南京210046）摘要：从蛋清中用724弱酸性阳离子交换树脂提取溶菌酶，然后用硫酸铵溶液洗脱，盐析得到溶菌酶。用葡聚糖凝胶层析（SephadexG-75）纯化溶菌酶，收集峰值处样品。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳鉴定个步骤留样及所得溶菌酶样品的纯度。溶菌酶得率为0.0474mg/100ml（0.03g/kg）；葡聚糖凝胶层析过程纯化样品得到了洗脱峰曲线，但未能收集到峰值处样品；电泳结果显示在纯化过程中
2、溶菌酶纯度不断升高。本实验溶菌酶得率较低，提取工艺有待改进，需进一步减少样品损失；层析过程需进一步熟练掌握，以更好达到纯化效果。关键词：溶菌酶；离子交换树脂，凝胶层析；SDS-PAGE Extraction,purificationandpurityofEgglysozyme YingsLi HuayJiang*(CollegeofLifeScience,NanjingNormalUniversity,Nanjing210046,China)Abstract: Fromeggwhite,with7
3、24weakacidcationexchangeresinextractionoflysozyme,andthenelutedwithammoniumsulfate,saltingtobelysozyme.Withdextrangelchromatography(SephadexG-75)purifiedlysozyme,thepeakofthesamplecollection.BySDS-polyacrylamidegel(SDS-PAGE)electrophoresisandidentified
4、stepstostaykindofpurityofthesamplesfromlysozyme.Lysozymeyield0.0474mg/100ml(0.03g/kg);dextrangelchromatographypurifiedsamplesobtainedduringelutionpeakcurve,butfailedtocollectsamplesatthepeak;electrophoresisshowedthatthepurificationprocessoflysozymeenzy
5、mepurityrising.Inthisstudy,lysozymewasthelowrateofextractionprocesscouldbeimproved,theneedtofurtherreducesamplelosses;chromatographyprocessneedsfurtherproficiencyinordertobetterachievepurification.Keywords: lysozyme,Ionexchangeresin,Gelchromatography,S
6、DS-PAGE 溶菌酶(Lysozyme,1,4－β－N－溶菌酶)是一种专门作用于革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的β-1,4-糖苷键的水解酶,因而又称为胞壁质酶或者N-胞壁质聚糖水解酶。溶菌酶在临床上是有效的消炎剂,在食品防腐和基因工程等方面也有广泛的应用。[1][2]溶菌酶来源广泛,人、动物、植物和微生物中均有发现,其中鸡蛋清中含量较高,因此,工业生产溶菌酶常以鸡。蛋清为原料鸡蛋清的溶菌酶是研究得最清楚的一种溶菌酶[3]，其化学性质稳定，纯品为白色或微黄色结晶体，易溶于水，不溶于丙酮、乙醇，是一种分子
7、量在14～15kD，等电点pH值在11.0左右，最适效应温度在50℃，最适pH值为6.0～7.0的碱性球蛋白。它的生物化学功能是催化某些细菌细胞壁多糖的水解，从而溶解这些细菌的细胞壁。溶菌酶的抗菌及抗病毒活力与pH值有关，在酸性介质中，活力显著增强。当前,溶菌酶的制备有多种方法，最常用的是离子交换树脂吸附法[4]。 溶菌酶的用途很多，由于它本身是一种天然蛋白质，无毒性，可以作为防腐剂、保鲜剂。在医药上，溶菌酶具有多种药理作用，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的功效，广泛应用于临床医学。溶菌酶是基因工程、细
8、胞工程、发酵工程中必不可少的工具酶，国外多用于菌体内容物质的提取，在发酵工业上是一种重要的溶菌剂，用于破坏细胞壁，制备无菌提取液。溶菌酶所具有的广泛用途吸引了国内外众多学者对其进行研究，已发表不少关于溶菌酶的试验报道。 1材料和方法1.1材料与仪器 新鲜鸡蛋3颗,购自市场；724型酸性阳离子交换树脂；灭菌纱布；1mol/LNaOH，1mol/LHCl；蒸馏水（实验室桶装水）；磷酸缓冲液（pH6.5，0.15M）；10％（NH4）2SO4溶液；固体（NH4）2SO4
