复方芒果叶干膏抗肺纤维化作用及抗炎机制研究

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1、成都中医药大学二0一七届博士研究生学位论文复方芒果叶干膏抗肺纤维化作用及抗炎机制研究TheStudyonAnti-pulmonaryFibrosisEffectandAnti-inflammatoryMechanismofDryExtractofCompoundMangoLeaves研究生姓名：刘颖指导教师：邓家刚教授学科专业：中药学二○一七年五月万方数据成都中医药大学博士学位论文中文摘要肺纤维化(Pulmonaryfibrosis，PF)是一种由多种因素引起的以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱最终导致肺间质纤维化为特征的疾病。该病的主要病理特点是早期以下呼吸道急性炎症反应

2、为主，并伴随着大量成纤维细胞病理性增生转型，导致后期某些细胞外基质(Extracellularmatrix，ECM)成分在肺泡和间质内沉积，纤维组织过度修复造成肺组织结构的紊乱、肺泡损伤、胶原沉积，最终导致肺纤维化。随着工业化的发展，肺纤维化发病率呈逐年上升趋势，因其缺乏有效的治疗手段，预后差、死亡率高，严重危害人类健康与生命。肺纤维化的发病机制欠清晰，其中炎症反应、免疫反应和胶原沉积是对肺纤维化发病机理的重要诠释。目前临床上以糖皮质激素和免疫抑制剂治疗为主，但只能在一定程度上缓解某些症状，不能从根本上逆转和治疗，也不能防御肺纤维化，并有不同程度的毒副作用。对于肺纤维

3、化，中医药以其丰富的临床用药经验以及多成分、多靶点、多通路治疗手段为特点，近年来受到了国内外学者的重视。复方芒果叶(Compoundmangoleaves，CML)干膏系广西终身教授、名中医邓家刚主任医师根据多年临床经验拟定的治疗肺纤疾患的复方。本研究以复方芒果叶干膏为研究对象，采用博莱霉素(Bleomycin，BLM)介导的肺纤维化动物模型对其相关病理学、细胞因子、差异蛋白等进行药效与机制的探讨，并利用细胞炎症模型筛选复方芒果叶干膏有效抗炎物质及研究复方对肺纤维化相关的炎症通路的作用。主要研究内容和结果如下：1、复方芒果叶干膏抗肺纤维化药效研究：运用BLM气管注射法

4、建立小鼠肺纤维化模型，观察小鼠的整体情况、病理表现以及检测肺组织中羟脯氨酸(Hydroxyproline，HYP)、相关细胞炎症因子、相关抗氧化应激因子的表达水平，从体内水平上对复方芒果叶干膏抗炎、抗氧化以及抗纤维化药效进行评价。结果显示，复方芒果叶干膏高剂量组小鼠呼吸逐渐平稳、活泼好动、毛色整齐有光泽、进食正常、体重逐渐上升，中、低剂量组均有好转。另外，复方芒果叶干膏高、中、低剂量组小鼠肺组织的肺指数均显著性降低(P＜0.001)。以上提示：复方芒果叶干膏从整体水平上对肺纤维化小鼠的状态和肺组织具有保护作用。病理观察发现，苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-

5、eosinstaining，HE)观察模型组肺组织结I万方数据成都中医药大学博士学位论文构破坏严重，损伤分布较广，部分支气管腔和肺泡腔内可见大量炎性渗出物，中度至重度肺泡炎伴纤维组织增生及纤维化致肺实变，给药组肺组织结构清晰、形态正常，肺泡炎和肺纤维化明显减少，未见弥漫性的炎症和纤维化，肺泡间隔增厚不明显。Masson染色可见高剂量组的纤维化程度明显减少，中、低剂量组纤维化程度亦相应减少。另外Szapiel评分结果显示复方芒果叶干膏高、中、低剂量组小鼠肺组织的肺泡炎程度均显著性降低(P＜0.001)，Ashcroft评分结果显示复方芒果叶干膏高、中剂量组小鼠肺组织的纤

6、维化程度均显著性降低(P＜0.001)。此外，经过药物干预后，复方芒果叶干膏高、中、低剂量组小鼠肺组织中HYP含量显著性降低(P＜0.001)。以上提示：复方芒果叶干膏具有保护肺组织，明显降低肺泡炎、胶原沉积以及肺纤维化的作用。抗炎和抗氧化研究作用发现，复方芒果叶干膏高剂量组小鼠肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均显著性降低(P＜0.001或P＜0.01)；中剂量组小鼠肺组织中IL-6、TNF-α的含量均显著性降低(P＜0.001或P＜0.05)。复方芒果叶干膏高、中、低剂量组小鼠肺组织中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)水平显著性降低(P＜

7、0.001)，超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、总抗氧化能力(Totalantioxidantcapacity，T-AOC)水平均显著性升高(P＜0.001或P＜0.01或P＜0.05)；高、中剂量组小鼠肺组织中还原型谷胱甘肽(Reducedglutathione，GSH)水平显著性升高(P＜0.001)。结果提示：复方芒果叶干膏对肺纤维化具有良好的抗炎和抗氧化作用。2、复方芒果叶干膏抗肺纤维化机制研究：运用同位素标记相对和绝对定量(isobarictagsforrelativeandabsolutequantific