分子诊断学重点1

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1、分子诊断：应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术，称为分子诊断。分子诊断学：是临床检验诊断学的一个重要分支，它利用分子生物学技术来研究机体外源性和内源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的改变，从而为疾病的预测、预防、诊治和转归提供分子水平信息。基因：基因是一段携带功能产物（多肽、蛋白质、tRNA.iRNA和某些小分子RNA）信息的片段基因组：是指生物体的一套完解的单倍体遗传信息，包括所冇基因和基因间的区域。基因组学：指对所有基因进行基因组作图（包括遗传图谱、物理图谱、转录图谱）、核卄酸序列分析、基

2、因定位和基因功能分析的一门科学。人类基因组多样性：即人类基因组的个体差界。生物大分子：指分子体内由分子量较低的基木结构单位首位相连形成的多聚化合物。CsCl-EB密度梯度超速离心法：CsCl-EB法是一种沉降平衡离心法，经超速离心，离心介质CsCl形成一连续的密度梯度，在过量EB存在的条件下，各种不同密度的物质经离心平衡后得以分开。（CsCl-EB法分离质粒和染色体DNA就取决于澳化乙锭与线状及闭环DNA分子的结合量有所不同）。Western印迹：蛋白质印迹，又称免疫卬迹，是一种通过标记的抗体检测经SDS-PAGE分离的特定蛋白质的技术。克隆载体

3、：能携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的一类DNA分子，用于在宿主细胞中克隆和扩增外援DNA片段表达载体：能携带H的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的一类DNA分子，用于在宿主细胞中获得外援基因的表达产物。重组DNA技术：是指在基因水平上，将目的DNA在体外巫组于能自我复制的载体DNA分子上，然后将重组DNA导入宿主细胞中进行增生，以获得大戢的目的DNA片段，或以此为基础，通过基因的诱导衣达，得到人量相应蛋白质产物的过程。基因组文库：将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段，并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的

4、基因组DNA片段的集合，即基因组文库，它包含了该生物的所冇基因。CDNA文库：提取组织细胞的mRNA,逆转录成Cdna,与适当载体连接后转化受体细胞，得到含重组DNA的噬菌体或细菌克隆，从而构建成某种生物的cDNA文库。基因工程:乂称某因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论某础,以分子牛物学利微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因（DNA分子），按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞，以改变生物原冇的遗传特性、获得新品种、生产新产品PCR即聚合酶链反应，是利用DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）等在体外条件下，催

5、化一对引物间的特异DNA片断合成的基因体外扩增技术。核酸分子杂交：不同来源的单链核酸分了在适合的温度和离了强度下，通过碱基互补形成双链杂交体的过程生物芯片：是采用类似集成电路制作中的微加工技术，将生命科学硏究中的若干不连续过程集成到一块几平方厘米人小的芯片上，并使这些分散的过程连续化与微型化，以此来实现对人量生物样品中各数据的快速自动和并行处理。基因芯片：将大量的基因片段有序地，高密度的排列在玻璃片或纤维膜等载体上，称Z为基因芯片。第二章1分子诊断的主要特点是什么？主要特点：直接以疾病基因及其表型为检测对象，特异性高，属于病因学诊断，其检测结果不

6、仅具有描述性，且具有准确预测性;分子诊断不仅可准确诊断有基因表型异常的疾病，更重要的是其可对疾病基因型的变异作出判断。2、分子诊断学经历了哪几个发展阶段？每个阶段各有什么特征性技术得到建立及应用？第一阶段：主要利用DNA分子杂交方法进行遗传病的基因诊断。第二阶段：创建并利用PCR技术。第三阶段：以生物芯片为代表的高通量密集型技术。4、真核牛•物基因组结构特点有哪些？与原核比较，主要区别是什么？真核生物基因结构特点：1）基因组庞大2）线状双链DNA和二倍体3）非编码区远多于编码区4）功能基因大多不连续5）重复序列与原核的区别:真核原核基因组大小庞大

7、较小操纵子无广泛存在DNA线状双链二倍体环状双链基本为单倍体非编码区90%以上50%左右内含子与外显子并存无5、真核生物线粒体基因组有何特点？①非孟德尔的母性遗传②高突变率③异质性和复制分离④阈值效应⑤半保留复制与协调作用6、什么是人类基因组多样性？产生多态性的方式主要是什么？人类基因组多样性：即人类基因组的个体差异。产生的主要方式：（1）重复序列单元的拷贝数变异（2）可转座元件导致的分子多态（3）单个核苜酸的变异第三章2、酚抽提法制备真核基因组DNA的原理及相关试剂的作用。酚抽提法：主要利用基因组DNA较长的特性，将其与细胞器或质粒等小分子DN

8、A分离。首先在含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶的条件下裂解细胞，经蛋白酶K处理后，用pH8.0的Tris饱和酚抽提DNA,加入一