蛋白质分离纯化方法的研究进展

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1、蛋白质分离纯化方法的研究进展摘耍：蛋白质是一类最重要的生物人分子，在生物体内占育重要的地位，是生物功能的载体。蛋白质的分离纯化是蛋口质研究中必不可少的一个环节，木文根据蛋白质的性质特点，主要针对近几年蛋白质分离纯化的方法做了一个综述。关键词：蛋白质；分离；纯化；展望；ProteinseparationandpurificationmethodsofresearchLUZhongying*,YAOyuanyong,CHENShixuc,XingMingming,XIEYong,(InstituteofMaterialandChemicalEngineer

2、ing,TongrenUniversity,TongrenGuizhou554300)Abstract:Proteinisoneofthemostimportantclassofbiologicalmacromoleculesinvivoplaysanimportantrole,isthebiologicalfunctionofthecarrier.Proteinseparationandpurificationofproteinsisanessentialpartofthestudy,thispaperbasedonthenatureofthepro

3、teincharacteristics,inrecentyears,mainlyforproteinseparationandpurificationmethodstodoareview.Keywords:protein;separation;purification;Outlook蛋白质在牛物体的牛命活动的过程中发挥着重要作用，他参与了催化代谢反应、物质运转、兴奋的传导、生长与发育的调控等。蛋白质广泛存在于动植物体系屮，大多数的蛋白质在动植物细胞内的含量极低。欲将蛋门质从生物体系中提取分离出来，同时保证蛋门质组成成分、结构性质和生物活性均不变，目前还

4、存在较大的难度。本文根据蛋白质的理化性质特点，主要针对近儿年蛋白质分离纯化的方法做了一个综述。1蛋白质分离纯化的材料选择和预处理以蛋白质的结构特点和功能为基础,在实际操作屮，根据所分离纯化原材料性质差异,而采取不同方法进行预处理。对于材料的选择，微生物、动物和植物都可做为制备蛋门质的原材料，对于微生物，应重点观察生长期，主要原I大1为处于对数生长期的微生物，具屮含量较高的时酶和核酸，可以获得高产量。动物材料必要对结缔组织和脂肪组织进行处理除去，植物材料除要经过去壳、脱脂的同时，对其细胞壁也要进行破碎，细菌的细胞壁可以选収不同方法对其破碎。破碎法日前较常

5、用超声波振荡、研磨、高压挤压或酶处理等方法。2蛋门质分离纯化方法2.1粗提2.1.1沉淀法2.1.1.1盐析沉淀法盐析沉淀法将不同蛋白质加入一定浓度的盐溶液中，根据其溶解度降低程度的寿别，从而达到彼此分离的方法，是蛋门质和酶提纯工艺中最早釆用，到现在仍广泛应用的此方法。蛋门质分子表面亲水基【才I越多，水化层越厚。章亮［1］采用盐析法提取羔羊皱胃酶的条件进行研究，系统分析了不同因素对盐析效果的影响。2.1.1.2等电点沉淀等电点沉淀英原理是利用不同的蛋白质其等电点不同來分离蛋白质。王发祥等［2］提岀了-•种以等电点沉淀方法纯化苏云金杆菌CrylAc蛋白的

6、原毒素，再用分子筛层析纯化其活性毒素的方法。2.1.13有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法是向蛋门质等生物大分了的水溶液中加入多倍右机溶剂，从而使蛋门质分子的溶解度显著降低，使其沉淀析HloLee等［3］用99%乙醇桅子果实浸渍数月，提収片并经硅胶柱层析，最后获得英中的糖蛋口。2.1.2离心2.1.2.1差速离心法差速离心法英原理是通过不断增加相対离心力，人小不同的颗粒沉降速度差界，通过离心速度和时间不同进行多次离心，从I何达到分离。茅速离心法的优点是样品的处理暈较大，可用于大量样品的初分离。其缺点是分离复杂样品和要求分离纯度较高时,离心次数多，操作繁杂。由

7、于沉淀的多次清洗、溶解、再沉淀，容易引起中间损失，所以离心分辨力差。2.1.2.2密度梯度离心密度梯度离心法又称为区带离心法。此法可以使样品屮几个或全部组分分离,具有良好的分辨率。魏颖娟筹［4］采用两步蔗糖密度梯度离心法纯化质膜，结合双水相和蔗糖密度梯度离心作为两种不同的提取及纯化质膜的方法，可以进一步纯化质膜得到更好的分离效果。2.2精提2.2.1层析(chromatography)221.1离子交换柱层析离子交换层析是以离子交换剂为柱填充物，在中性条件下，依据流动和屮的组分离了与交换剂上的平衡离子可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种展析方法。

8、近儿年亲和层析在基因工程亚单位疫苗的分离纯化的应用屮具有广泛性。罗轻蕾等［6］采用硫酸钱沉淀和