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《猪常见传染病的PCR诊断引物(精选)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、一、猪繁殖与呼吸障碍综合征1、引物序列N・U:5'・GCAAGCAGCAAAAGAAAAAGAAGG・3‘；N-L:5z-GCGTCGGCAAACTAAACTCCACAG-3f2、预期扩增片断长度为309bp,3、反应条件：95°C预变性5min后，进行如下循环:94°C,30sec；57°C,30sec；72°C,50sec,35个循环。72°C延伸30min。二、猪圆环病毒1、引物序列:唐万寿等.猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及其应用[J].动物医学进展.2008,29(6):54-57P1:5AGTCTGGT
2、GACCGTTGC・3'P2:59-TTCCTCCGTGGATTGTTC-39(493bp)95°C5min,94°C50s,52°C50,72°C50s,35循环，72°C10min2、扩增目的片段大小为3、反应条件：体系：lOxbuffer2.5dNTP(2.5mM)2引物Pl(50pmol/
3、iL)0.5引物P2(50pmol/gL)0.5r-Taq(5U/pL)0.2ddH2O16.3DNA模板3Total25三、猪瘟1引物序列：猪瘟CSFV1:5，・GCTCCTGGTTGGTAACCTCGG・3'CSFV2:
4、5'・TGATGCTGTCACACAGGTGAA・3'2片段大小：507bp'反应条件：采用100「L反应体系，在20rLcDNA产物管中加入6「L25mmol/LMgC12,8「LIO「PCR缓冲液，lOOpmol/「L弓
5、物XZ98和引物XZ99各1「L,0「5「L5U/「LTaqDNA聚合酶，用无菌水加至总体积为100「L。置PCR仪上，首先94「变性5min;然后94「变性1min,60「退火1min,72「延伸1min,循环35次；最后72「延伸10min,于4「结束反应。四、猪伪狂犬病PRV1:5'一GCG
6、TGTACTGCGACTGCGTGTT—3PRV2:5'一CGACCTGGCGTTTATTAACCGAGA一3PcR反应如b:10Xbuffers5P1MgCL2（25mmol/L）5u1dNTPs（25nunol/L）4u1ExTaqase（SUI林L）0.3u1Pl0.5u1P20.5P1DNA2卩1ddH2O32.7u1total50u194°C预变性5min,随后作如下循环:94°C30s,57°C30s,72°Clmin,共25个循环，循环结束后72°C延仲5mino五、细菌性疾病主要有猪链球菌病1引物：根据
7、GenBank中已登录的cps2J（GenBank登录号：AF118389）、mrp（GenBank登录号：A24025）、ef（GenBank登录号：A24023）三个基因，利用Primerprimer5设计引物：cps2J的引物为：SS1：5'・GATAGATGACGGTTCTTCAGATT-3?SS2：5'・TCCTCTCCTAACCACTGTTCAG・3'2片段大小:分别为，450bp3体系：采用25uL反应体系，反应过程为：cps2J的扩增条件为：94°C预变性5min,94°C变性1min,54°C退火1m
8、in,72°C延伸1min,32个循环，72°C延伸10min；mrp和ef的扩壇条件为：94°C预变性5min,94°C变性1min,56°C退火1min,72°C延伸1min,32个循环，72°C延伸10min六、副猪嗜血杆菌病、1引物：HPs1:59-GTGATGAGGAAGGGTGGTGT-3'HPs2:5,-GGCTTCGTCACCCTCTGT-3'2大小：822bP3体系：PCR扩增体系25uL,10Xbuffer2.5uL,dNTP2.5mmol/L2.5uL,Mg2+25mmol/L2.0uL、上下游引
9、物20卩mol/L各0.5uLTaq酶1.5UDNA模扳200〜400ng最后加灭菌蒸馆水至25uL.程序：94°C预变性5min；94°C30s、60°C30s、72°C45s,30个循环；最后72°C延伸10min.七、猪喘气病1、引物序列MPS1:5'CCAGGATGCACAAAATAACTG3'MPS2:5ACCCGAAGAACTTCAACAGC3'2、扩增片段长约795bp,3、反应条件体系：lOxbuffer2.5
10、iLdNTP2
11、iLMgCb(25mmol/L)1.5(iL引物1
12、1L模板0.25pL灭菌
13、三蒸水16.5pLTaqDNA聚合酶0.25
14、iL以上各种液体混匀后，放入PCR仪屮扩增。程序：为94°C5min；然后94°Clmin,52°Clmin,72°C2min,共30个循环；最后再以72°C延伸lOmino八、猪传染性胸膜肺炎1、引物序列Appl:5
