坑的10株芽胞杆菌的鉴定及其系统发育分析

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1、采至秦始皇兵马俑一号坑的10株芽胞杆菌的鉴定及其系统发育分析刘国红込刘波2,林乃铃】，唐建阳21福建农林大学福州350002,2福建省农业科学院农业生物资源研究所福州350003）摘要：芽胞杆菌分布广泛，世界各地到处都冇芽胞杆菌的踪迹。【目的】为了了解秦始皇兵马俑坑中土芽胞杆菌的多样性，同时也为了丰富极端环境下芽胞杆菌的地理分布，【方法】木文从秦始皇兵马俑一号坑屮采集土壤样品,采用温度筛选法和稀释梯度涂布法分离到了10株芽胞杆菌,通过16SrRNA作为鉴定手段对这10株芽胞杆菌进行鉴定，【结果】通过16SrRNA将10株

2、芽胞杆菌鉴定为4种芽胞杆菌，且其中2株可能为新种。【结论】本文研究结果表明秦始皇兵马俑一号坑中土中存在着丰富的芽胞杆菌种类，丰富了芽胞杆菌地理分布。关键词：芽胞杆菌；鉴定；系统发育；秦始皇兵马俑中图分类号：Q939文献标识码：A文章编号：芽胞杆菌是一类重要的微生物类群，由于在食阳、农业、工业、医学、冶金、林业、环保乃至军事等诸多方血均有重要的应用价值，其系统发冇分析和分类学研究具有极冀重要的意义。在原核生物的系统发育分析及分类地位的确定■!',16SrRNA基因作为一种理想的研究材料而被广泛应川。芽胞杆菌分布广泛，特别是

3、极端环境如南极⑷、火山⑴、沙漠⑹、深海⑺、温泉⑻、盐III⑼、矿藏[0等中常有芽胞杆菌的踪迹。秦始皇兵马俑一号坑发掘8000平方米，出土陶俑、陶马2000多件，战车20多乘，兵器4万余件。它是研究价值极高的一处古文化遗址.被誉为“世界第八大奇迹”，被埋在地下具有两千多年的历史，里面的环境可以堪称是一种极端环境。为了了解秦始皇兵马俑坑中土芽胞杆菌的多样性，同时也为了丰富极端环境卜•芽胞杆菌的地理分布，本文首次报道研究了秦始皇兵马俑一号坑中土中芽胞杆菌的系统发育多样性。1材料与方法1.1材料1・1・1样品的采集、分离与纯化：

4、从陕西省西安市秦始皇兵马俑1号坑屮采集土壤样品200g,称取10g土样至90mL无菌水，混匀后，采用温度筛选法和梯度稀释涂布法分离芽胞杆菌。在分离过程屮，挑取单个菌落重复划线2-3次，同时镜检其纯度，直至获得纯培养。挑取菌落特征不同的菌株进行转管保存采用-80°C油冷冻法保藏备用。经上述试验，共获得供试芽胞杆菌10株。参比菌株和分离菌株见表k项目：国家973项目前期研究专项（2011CB111607）；农业部“引进国际先进农业科学技术”重点项目（948项目）（2011-G25）通讯作者：刘波Tel:+86-591-878

5、82571;Fax:+86-591-87882571;E-mail:liubo伦as@163.com；作者简介：刘国红（1983-）,汉族，山东聊城人，博士研究生，主要从事芽胞杆菌分类方面硏究。E-mail:liuguohong624@sina.com收稿日期：：修回日期：O表1供试菌株Table1StrainsusedinthisstudyStraincodeSpeciesSourceStraincodeSpeciesSourceFJAT-13824Bacillussp.陕四西安兵马俑ATCC14579Bacillus

6、cereus美国FJAT-13825Bacillussp.陕西西安兵马俑ATCC10792Bacillusthuringiensis,美国FJAT-13827bacillussp.陕西西安兵马俑AmesBacillusanthracis美国FJAT-13828Bacillussp.陕西西安兵马俑DSM319Bacillusmegaterium.徳国FJAT-13829Bacillussp.陕西西安兵马俑DSM12442Bacilluspseudomycoides徳国FJAT-13830Bacillussp.陕西西安兵马俑

7、KBAB4Bacillusweihenstephanensis-FJAT-13831Bacillussp.陕西西安兵马俑BCRC17124Bacillusmojavensi台湾FJAT-13832Bacillussp.陕西西安兵马俑ATCC6633Bacillussubtilis美国FJAT-13833Bacillussp.陕西西安兵马俑TU-B-10Bacillussubtilis-FJAT-13834Bacillussp.陕西西安兵马俑DSM13Bacilluslicheniformis.徳国DSM7264Bacil

8、lusatrophaeus德国ATCC7061Bacilluspumilus美国C3-41Lysinibacillussphaericus-Bl4905Lysinibacillusfusifonnis-TF-12Bacillusaquimaris-DSM2048Bacillusmycoides徳国1.1.2主要仪器和