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《毕业论文（设计）-土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、土壤中产淀粉酶芽抱杆菌的筛选及鉴定广州大学生命科学学院姓名：张宣琪班级：生技121班学号：1214300094同组组员：徐婷婷刘海伦张黎明崔仁洪叶毅航一、摘要本实验从土壤中分离出能产淀粉酶的芽他杆菌并对其进行鉴定、保存，实验屮涉及菌株的分离纯化、菌株的形态学鉴定和生理生化鉴定，根据伯杰式细菌学手册鉴定其种屈。实验中通过80°C水浴20min预处理，杀死无芽抱菌体，筛选出芽抱杆菌；再用稀释涂布平板法对芽泡杆菌进行初步筛选；又通过分区划线法对初筛菌株进一步分离纯化；最后用选择性淀粉培养基进行筛选，得到纯培养
2、的产淀粉的芽抱杆菌。最后并通过耐盐试验、明胶试验、糖发酵试验、VP试验、口引味试验等多项生理生化实验对筛选出來的菌种进行鉴定，鉴定结果为蜂房芽抱杆菌。二、关键词：淀粉酶芽砲杆菌生化鉴定三、实验材料与方法1、实验材料1.1土样的采集选取广大梅苑公寓楼下花园、广大生化楼前小河附近两处的土壤，五点法采集，边长15cm。铲去表层土，取10cm深土壤，每一个土样约25g左右（每个点5g）o将土样放入无菌的纸袋中，并记录采集的时间、地点、植被类型,4°C冰箱中保存备用。分别记做A土样、B土样。1.2培养基淀粉筛选培
3、养基淀粉20g,蛋口腺10g,NaCl2.5g,琼脂10g,口來水1000ml,pH口然。斜面种子培养基牛肉膏3g,蛋口10g,NaCl5g,琼脂15〜20g,自来水1000ml,pH7.2〜7.4；蛋白月东液体培养基（作酬味实验用）蛋白豚10g,NaCl5g,自来水1000ml,pH7.2〜7.4,121°C灭菌20min；葡萄糖蛋白月东培养基（VP和MR试验用）蛋白豚5g,葡萄糖5g,NaCl5g,自来水1000ml,pH7.2〜7.4,121°C灭菌20min；糖发酵培养基（作糖酵解试验用）蛋白腺
4、2g,NaCl5g,K2HP040.2g,1%澳麝香草酚蓝水溶液3ml,待试糖10g（—般糖或醇按1%量加入，而半乳糖、乳糖按1.5%的量加入），自来水1000ml,pH7.2〜7.4；酪氨酸平板（作酪氨酸水解试验用）L—酪氨酸0・5g悬浮于10mL蒸馅水中,20分钟灭菌,然后于lOOmL无菌的营养琼脂混合，即成酪氨酸水解平板；酪素平板（作酪素水解试验用）取5g脱脂奶粉加入50mL蒸镉水中（或用50mL脱脂牛奶），另称1.5g琼脂溶于50mL蒸惚水中，将两液分开灭菌。待冷至45—50°C时，将两液混匀倒
5、平板，即成牛奶平板；西蒙斯氏柠檬酸盐培养液（作柠檬酸盐利用试验用）柠檬酸钠2g,NaCl5g,MgS04-7II200.2g,K2IIP04-3II201g,（NI14）2I1PO41g,1%澳麝香草酚蓝水溶液10ml,琼脂15〜20g,自來水1000ml,pH7.0,121°C灭菌20min；淀粉牛肉膏蛋白陈琼脂培养基可溶性淀粉2g,牛肉膏3g,蛋口月东10g,NaCl5g,琼脂15〜20g,蒸惚水1000mL,pH7.2〜7.4；（2%、5%、7%）高盐培养基（做耐盐试验用）牛肉膏3g,蛋白J®10
6、g,NaCl（2g、5g、7g）,琼脂15-20g,蒸憾水1000mL,pH7.2〜7.4；明胶培养基（做明胶液化试验用）牛肉膏3g,蛋白豚10g,明胶12g,蒸傭水1000mL,pH7.0；半固体培养基（作运动性实验用）琼脂含量0.5%,其他组分比例按牛肉膏蛋白豚培养基配制；1.3试剂和仪器1.3.1试剂耐盐性试验：NqCI粉末。糖酵解实验：葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘霜醇。革兰氏染色：草酸钱结晶紫染色液，卢戈氏碘液，95%乙醇，0.5%沙黄染色液。芽他染色：5%孔雀绿染色液，0.5%沙黄染色液。V.P
7、试验（MR试验）：40%Na0H溶液，奈酚。口引味试验:乙醯，口引味试剂。碘原液：碘llg,碘化钾22g,加水定容至500mLo单-染色：草酸鞍结晶紫或石炭酸复红。硝酸盐试验：甲液（对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100mL；乙液-奈胺0.5g+5mol/醋酸lOOmL）；酪素水解：脱脂奶粉。酪氨酸水解：I厂酪氨酸。溶菌酶抗性实验：溶菌酶。卵黄反应：新鲜鸡蛋。硝酸盐试验：硝酸盐明胶液化试验：明胶柠檬酸盐利用试验：四蒙斯氏柠檬酸盐1.3.2仪器：无菌培养皿，接种环，土样，三角瓶，烧杯，试管，酒精灯，
8、无菌吸管，载玻片，吸水纸，涂布器，显微镜，移液管，移液枪等。恒温摇床，恒温培养箱，高压蒸汽灭菌箱，超净工作台，恒温水浴箱，磁力搅拌器等。2、试验方法1.1十.壤样品悬液制备2.1.1土壤悬液制备各称取5g土壤样品于装有45ml无菌水的100ml锥形瓶中，加入玻璃珠与土壤悬液一起振荡，制成土壤悬液。置100°C沸水浴10min,以杀死非芽抱杆菌。静置5mino2.1.2土壤悬液稀释吸取上清液0.5ml加到含有49.5ml无菌水的三角瓶屮，配成
