不同来源体细胞诱导形成多能性干细胞(iPS)的比较研究.pdf

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1、分类号：Q28学校代码：10392学科专业代码：071009学号：200901459福建医科大学硕士研究生毕业论文不同来源体细胞诱导形成多能性干细胞（iPS）的比较研究Thecomparisonofsomaticcellsfromdifferentsourcesinducedintopluripotentstemcells（iPS）学位类型：理学硕士所在学院：基础学院研究生：李宏宇学科、专业：细胞生物学导师：江一平教授研究起止日期：2010年07月至2012年04月答辩日期：2012年06月10日二○一二年六月万方数据2万方数据目录中英文缩略词表………………………………

2、……...…………………………2中文摘要……………………………………………...…………………………3英文摘要……………………………………………...…………………………5前言…………………………………………………...…………………………7材料与方法…………………………………………..……………………….…9实验一骨髓间充质干细胞的制备……………………………………12实验二脂肪干细胞的制备……………………………………………16实验三胚胎成纤维细胞的制备………………………………………21实验四鼠尾成纤维细胞的制备………………………………………25实验五病毒的制备…………

3、…………………………………………28实验六诱导体细胞形成诱导性多能干细胞…………………………34结果………………..……………………………………………………………39讨论…………………………………………..…………………………………48结论……………………………………………..………………………………53参考文献…………………………………………..……………………………54致谢………………………………………………..……………………………57综述……………………………………………………..………………………583万方数据英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称ADSCadi

4、pose-derivedstemcell脂肪干细胞Ampampicillin氨苄青霉素BMMSCbonemarrowmesenchymalstemcell骨髓间充质干细胞BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜DNAdeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸EDTAethylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸hhour小时iPSCinducedpluripotentstemcells诱导性多能干细胞KRBKrebs–Ringerbicarbonatebuffer克–林

5、碳酸氢盐缓冲液LBluria-bertaniculturemediumLB培养基MEFmouseembryonicfibroblast胚胎成纤维细胞minminute分钟MTFmousetailfibroblast鼠尾成纤维细胞PBSphosphatebufferedsaline磷酸缓冲生理盐水PDLPoly-D-lysine多聚-D-赖氨酸rcfrelativecentrifugalforce相对离心力rpmrevolutionsperminute每分钟转速RTroomtemperature室温ssecond秒S-Pstreptomycin-penicillin青/链

6、霉素TFtranscriptionfactor转录因子wweek星期4万方数据不同来源体细胞诱导形成多能性干细胞（iPS）的比较研究中文摘要目的：通过对不同来源体细胞进行多能性干细胞（iPS）诱导，计数其类克隆数、计算类克隆率，比较并分析其诱导效率差异，旨在寻找一种能以较高效率诱导iPS的途径，为再生医学研究提供更好的技术平台。方法：1.原代分离、培养骨髓间充质干细胞（BoneMarrowMesenchymalStemCell，BMMSC）、脂肪干细胞（Adipose-DerivedStemCell，ADSC）、胚胎成纤维细胞（MouseEmbryonicFibrobl

7、ast，MEF）及鼠尾成纤维细胞（MouseTailFibroblast，MTF），获得稳定传代的细胞；2.扩增培养含有3种转录因子质粒的大肠杆菌DH5α，进行质粒大提，将质粒转染至Plat-E包装细胞内，合成病毒；收集、浓缩病毒液，分装，-80℃超低温冰箱保存，备用；3.将4种细胞分别铺种于同一6孔板的4个孔内，并用浓缩病毒感染各体细胞，培养过夜后，全量换液；每2-3天换液一次，观察细胞状态及是否出现类克隆，计数类克隆。结果：1.分别获得BMMSC、ADSC、MEF、MTF类似细胞系；2.类克隆率结果为，BMMSC2.55±0.25/万