肠球菌SYBR Green I实时定量PCR检测方法的建立及应用-论文.pdf

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1、第48卷第3期河南农业大学学报Vo1．48No．32014年6月JournalofHenanAgriculturalUniversityJun．2014文章编号：1000—2340(2014)o3一O315—05肠球菌SYBRGreenI实时定量PCR检测方法的建立及应用宋月，崔敏，王超群，付彤，韩立强，魏战勇，王亚宾(1．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002；2．北京汉业先科科技有限公司，北京101500；3．漯河出入境检验检疫局，河南漯河462000)摘要：为了建立肠球菌的实时定量PCR检测方法，以便更加快捷

2、、准确检测肠球茵．根据肠球茵16SrDNA高度保守的特性，在保守区设计1对引物，对其扩增条件进行探索，建立荧光定量PCR检测肠球茵的方法，并对方法的灵敏性、特异性、重复性进行评价，并在临床实践中进行检验．结果表明，所设计的引物能够在阳性样品中扩增出144bp的目的片段，并且与常见的茵群如绿脓杆菌、大肠杆茵、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆茵、变形杆菌等均不发生特异性扩增。检测的灵敏度为17拷贝·L～，在临床应用中，荧光定量PCR检测阳性率比普通PCR高18．87％．关键词：肠球菌；16SrDNA；荧光定量PCR中图分类号：$85

3、2．61文献标志码：AEstablishmentandpreliminaryapplicationofaSYBRGreenIrea1．timePCRmethodfordetection0fterococcusSONGYue，CUIMin，WANGChao．qun，FUTong，HANLi．qiang‘，WEIZhan．yong。，WANGYa—bin(1．CollegeofAnimalHusbandryandVeterinaryScience，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450

4、002，China；2．BeijingHanyeXiankeTechnologyCo．，Ltd．，Beijing101500，China；3．LuoheEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，Luohe462000，China)Abstract：ToestablishtheSYBRGreenIreal‘timequantitativePCRassaymethodsforquickerandmoreconvenientdetectionofEnterococcus．Apairofpri

5、mersweredesignedaccordingtothehighlyconservedcharacteristicsofEnterococcus16SrDNA，andthesensitivity，specificityandreproducibilityofourmethodwereevaluated，andfurthertestingwasdoneinclinicalpractice．A144bpregionoftheEnterococcus16SrDNAwasamplifiedusingourprimers，and

6、hadnocross—reactwithPseudomonasaeruginosa，Escherichiacoli，StaphylOCOCCUSaureus，Bacillussubtilis，Proteusandothercommonenvi—ronmentalbacteria．ThesensitivityanalysisshowedthatthedevelopedSYBRGreenIreal—timePCRmethodcoulddetect17coppies·L一．Inclinicalpractices．theestab

7、lishedmethodwasusedtode—tect61suspiciouspositivesamples，andtheresultsshowedthatthepositiverateusingtheSYBRGreenIreal—timequantitativePCRis18．87％higherthanthatofnormalPCR．Keywords：Enterococcus；16SrDNA；real-timequantitativePCR收稿日期：2013—09—20基金项目：国家重大星火计划项目(2001GA750

8、001)；河南省重大科技专项(111100110300)作者简介：宋月，1989年生，女，河南郑州人，硕士研究生，主要从事动物疾病分子诊断研究通讯作者：魏战勇．1975年生，男，河南安阳人，副教授．3l6河南农业大学学报第48卷肠球菌(Enterococcus)属于D群链球菌，20世TaKaRa宝生物工