拟南芥抗逆基因DREB2A转化大豆的研究-论文.pdf

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1、第32卷第5期大豆科学Vol_32N0．52013正10月S0YBEANSCIENCE0ct．20l3拟南芥抗逆基因DREB2A转化大豆的研究于志晶，蔡勤安，刘艳芝，齐广勋，马瑞(吉林省农业科学院农业生物技术研究所，吉林长春130033)摘要：为提高大豆的耐旱耐盐碱性，将拟南芥转录因子DREB2A序列优化后，构建了植物表达载体pCAMBIA3300一DREB2A，利用农杆菌介导法将DREB2A基因导人大豆品种Willimas82和Bert中，转化率分别为0．8％和3．2％。对抗性转基因植株进行PCR检测，2个品种分别获得阳性植株28和63株，表明DREB2A已整合到大豆基因组

2、中。关键词：大豆；DREB2A；耐盐耐旱；农杆菌介导遗传转化中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000-9841(2013)05-0606-03TransformationofSoybean、thStressRelatedGeneDREB2AfromArabidopsisYUZhi-jing，CAIQin—an，LIUYan—zhi，QIGuang—XUYI，MARui(InstituteofBiotechnology，JilinAcademyofAgriculturalSciences，Changchun130033，China)Abstract：Toimpr

3、ovethesaltanddroughttoleranceofsoybean，avectorofpCAMBIA3300一DREB2AwithstressrelatedgeneDR胎2Alr0mArabidopsisthalialtawasconstructed．DREB2AgenewasintroducedintosoybeanvarietiesWilliams82andBertbyAgrobacterium—mediatedtransformation．Theaveragetransformationfrequencieswere0．8％and3．2％．respective

4、ly．Twen—tv—eightand63positiveplantsrespectivelywereobtainedbyPCRidentification．TheresultsindicatedthatthegeneDREB2Ahadbeenintegratedintothegenomeofsoybean．Keywords：Soybean：D尺EA；Saltanddroughttolerance；Agrobacterium—mediatedtransformation干旱、盐渍化是限制作物生长的主要因素，是验用成熟大豆子叶节为受体，将DREB2A基因导人目前生产上亟需解决的

5、问题之一。虽然科研工作大豆，以期获得抗逆转基因大豆新材料。者试图用常规育种方法来提高作物的抗旱耐盐能1材料与方法力，但效果并不理想⋯。目前，国内外学者通过基因丁程改良作物，来提高作物的耐盐性。1．1供试材料自1988年Hinchee等和McCabe等率先获大豆品种Willimas82和Bert由中国农业科学得转基因大豆植株以来，转基因技术已经成为大豆院作物科学研究所提供；农杆菌EHA105菌株，本实分子育种和基因功能研究的重要手段。目前大豆验室保存。遗传转化方法有农杆菌介导法、基因枪转化法、PEG1．2植物表达载体构建法、花粉管通道法等，但最常用的方法主要是农杆以pCAMBI

6、A3300质粒为载体构建植物表达载菌介导法和基因枪法J。大豆农杆菌介导遗传转体，该质粒有bar标记基因，由35S启动子启动。将化常用的外植体有子叶节、体细胞胚、胚尖、器官愈DREB2A基因两端加上BamHI和SacI酶切位点，伤组织以及幼嫩种子、下胚轴、初生叶基等。其中连接到用BamHI和SacI双切的pCAMBIA3300载子叶节是在以器官再生途径为基础的大豆转化体体上，即获得植物表达载体pCAMBIA3300一系中最常用的外植体J。子叶节转化体系具有操DREB2A。用冻融法将该载体导入农杆菌EHA105作简便、外植体获得不受时间限制、操作周期短等中，用来转化大豆。特点，是

7、目前应用最为广泛的转化方法。1．3农杆菌介导的大豆转化DREB是一种转录因子，在逆境胁迫基因表达1．3．1外植体准备取表面光滑无痕的大豆成熟调控过程中起重要作用。Liu等从拟南芥中分离种子，用50naLNaC10+2mLHC1反应生成的氯气到5个AP2／EREBP类转录因子，分别命名为在干燥器中进行大豆种子表面消毒24h。将其放DREB1A、DREB1BDREB1CDREB2A、DREB2B，到超净台上吹风2h至种子无明显氯气味，接种在其中DREB1类转录因子与植物耐寒性有关；萌发培养基GM(B5无机物