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1、白药子黄酮提取及抗氧化活性探究摘要：目的利用响应面分析法优化白药子黄酮提取工艺,并对其抗氧化活性进行测定。方法在单因素实验的基础上,应用Box-Behnken设计试验，研究四个自变量对白药子黄酮产量的影响。采用邻二氮菲-Fe2+-H202法、DPPH法和ABTS法进行抗氧化活性研究。结果白药子黄酮最佳提取工艺：回流温度821、料液比1：28(g/mL)、乙醇体积分数为60%、回流时间30mino此条件得白药子黄酮含量为13.17mg/g(理论值为13.25mg/g),RSD=0.19%。其清除・OH、DPPH・和ABTS
2、的IC50值分别为0.1加g/mL、0.047mg/mL、0.36mg/niL,其中提取液对DPPH•清除作用最为显著。结论白药子黄酮提取物具有较强的抗氧化活性。关键词：白药子；黄酮；提取工艺；抗氧化活性中图分类号：R961文献标识码：A文章编号:1004-4949(2013)03-0-03白药子为防己科千金藤属植物头花千金藤StephaniacepharanthaHayata的干燥块根［1］。白药子始见于《开宝本草》，具有散瘀、消肿、止痛、清热解毒之功效，多用于痈疽肿毒、腮腺炎、毒蛇咬伤、跌打肿痛、咽痛喉痹等［2］。黄
3、酮类化合物对治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病和清除自由基、抑菌、抗癌等方面有显著效果，无毒副作用［3］。本文在单因素实验基础上，利用响应面分析法对白药子黄酮提取工艺进行了优化，并采用清除・0H、DPPH・、ABTS+自由基进行了体外抗氧化活性研究，为白药子开发利用提供理论依据。1材料、试剂和方法1.1材料、试剂及仪器材料：白药子采自甘肃省陇西县。将白药子清洗干净，烘干，粉碎过60目筛，备用。试剂：芦丁、2,6-二叔丁基对甲苯（BHT）（中国医药（集团）上海化学试剂公司），二苯代苦味腓基自由基（・DPPH）、2
4、,2-联氮-二（3-乙基-苯并嗟哇-6-磺酸）二铁盐（ABTS）（Sigma公司），抗坏血酸，硝酸铝，亚硝酸钠,氢氧化钠、三氯乙酸等均为分析纯。主要仪器：WFJ2100型可见分光光度计（上海尼龙柯仪器有限公司）；ER2000A型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；HH-4型数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）等。1.2方法1.2.1黄酮提取流程原料f洗净一烘干一粉碎过60目筛一最佳工艺条件下回流提取2次一合并滤液一定容一得黄酮备用液1.2.2黄酮含量测定［4］准确吸取0.16mg/mL芦丁标准液0.00.0.20.0.6
5、0.1.20、1.80、2.40、3.00、3.60mL,分别lOmL容量瓶中，依次加入5%的NaNO2溶液0.4mL,摇匀，放置6min,再加入10%的Al(N03)3溶液0.4mL,摇匀，放置6min,再加入5%的NaOH溶液4.OmL,用75%的乙醇溶液定容，放置15mino510nm处测其吸光度，得吸光度y与芦丁浓度x(mg/mL)的回归方程:y=13.541X-0.00227(R2=0.9998)将样品溶液稀释至一定浓度，精确吸取lmL于10mL容量瓶中，按上述方法测定吸光度，代入回归方程计算样品溶液总黄酮质量
6、浓度。1.2.3响应面法实验设计在单因素实验的基础上，根据Box-Behnken的中心组合实验设计原理，选择影响白药子黄酮含量的时间、温度、料液比、乙醇体积分数四个实验主要因素，考察白药子黄酮含量，实验因素水平设计见表1。根据中心组合实验设计方案进行实验，采用SAS9.2统计分析软件对实验数据进行回归分析，确定出最佳提取工艺。1.2.4白药子黄酮抗氧化实验1.2.4.1清除・0H自由基实验[5]采用邻二氮菲-Fe2+-H202法测定，测定波长为510nm,按表2加样。对照品为Vc、BHT(以下实验相同)。1.2.4.2清
7、除DPPH•自由基实验准确移取浓度为0.lOOOmg/mL的DPPH・自由基溶液1.20mL,分别加入不同质量浓度白药子总黄酮提取液，用95%乙醇补至总体积为5.OmL,混合均匀，常温反应30min后于517nm处测定吸光度A1；同上法，95%乙醇代替DPPH溶液，测定吸光度A2；同上法，95%乙醇代替样品液，测定吸光度Ao1.2.4.3清除ABTS自由基实验将5mL7mmol/L的ABTS甲醇溶液和0.088mL140mmol/L的过硫酸钾溶液混合均匀，室温避光反应12-16h,然后溶液用甲醇稀释，使其溶液在734nm
8、处的吸光度值为0.70±0,02,即得ABTS+自由基工作液。分别移取4mLABTS+溶液和0.5mL不同质量浓度的样品溶液，混匀，室温避光反应10min后于734nm处测定吸光度A1,同上法，甲醇代替ABTS+溶液，测定吸光度A2；同上法，用甲醇代替样品液，测定吸光度A。2结果与分析2.1白药子黄酮提取工艺优化结果
