酶辅助法提取藕节中总黄酮及·OH清除活性研究.pdf

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1、澎江学J-：种学2014年第3期。墨囵文献著录格式：李会端，李云兴．酶辅助法提取藕节中总黄酮及·OH清除活性研究[J]．浙江农业科学，2014(3)：383—386酶辅助法提取藕节中总黄酮及·OH清除活性研究李会端，李云兴(楚雄师范学院，云南楚雄675000)摘要：优选藕节中总黄酮的提取工艺条件，并研究其对羟自由基(·OH)的清除活性。采用纤维素酶辅助法提取藕节中的总黄酮，以70％乙醇固定提取，固定料液比为1：20g·mL和回流时间为1h。设计单因素试验初步探究了酶浓度、酶解温度、酸碱度、酶解时间4个单因素条件对总

2、黄酮提取率的影响，’设计L。(3)正交试验确定了藕节中总黄酮提取的较佳试验条件。结果显示，酶浓度0．20mg·mL一，酶解温度55℃，pH为5．0，酶解时间2．5h为藕节中的总黄酮提取的较佳条件，藕节中总黄酮提取率为2．680％。探究了藕节黄酮提取液对·OH的清除活性，与BHT的抗氧化剂活性对照，藕节总黄酮提取液对一OH有较强的清除活性。关键词：酶辅助法；藕节；总黄酮；提取率；单因素试验；正交试验；清除活性中图分类号：TS201．2文献标志码：A文章编号：0528-9017(2014)03—0383-04黄酮类化合

3、物泛指2个苯环中间通过3个碳原碎，备用。无水乙醇；纤维素(>30U·mg)；子连接形成的一系列化合物。黄酮类化合物具有抗芦丁标准品、二丁基羟基甲苯、水杨酸、氢氧化氧化、抗癌、消炎、杀菌、抗病毒和调节肌体免疫钠、硝酸铝、亚硝酸钠、硫酸亚铁、双氧水、氯化力等功效”黄酮类化合物的提取方法有传统浸铝(分析纯)；三氯化铁；锌粉；亚硝酸钠；硝酸提法、超声波提取法、微波提取法、超临界流体萃铝；氢氧化钠等。取法及酶解法。由于植物细胞壁的束缚作用，722型光栅分光光度计(山东高密彩虹分析仪使得总黄酮在提取过程中不易溶出。纤维素酶能降

4、器有限公司)，CP214~电子天平，HH：S2s恒温水解植物细胞壁的纤维素骨架，增加细胞内活性成分浴箱，J1050型托盘天平，DFY-500500g摇摆式的溶出，进而释放出黄酮。纤维素酶辅助法提取植高速中药粉碎机，电热鼓风恒温干燥箱，回流装物中的总黄酮，具有操作简单、提出率高等特点。置，蒸馏装置，容量瓶，吸量管等。．酶解法提取山楂中总黄酮，提取率高达(2．67±1．2试验方法0．06)％。莲藕属睡莲科植物，在我国有悠久的1．2．1总黄酮提取率的计算方法栽培历史。藕节为藕的干燥根茎节部。藕有较高的以芦丁标准品为对照，

5、测定藕节中总黄酮的提食用营养价值，但藕节因不能进食往往容易被人们取率，藕节总黄酮提取液的显色反应参考文献所忽视。。。余美料等采用纯物理的工艺流程提[10]。分光光度计测量吸光度(D)值，与总黄取莲藕中黄酮类物质，利用紫外线分光光度法测得酮浓度服从Lambe~一Beer定律。将藕节提取液的样品中总黄酮的含量为1．13％。作者拟采用纤维吸光值代入线性回归方程，计算提取液中总黄酮浓素酶酶解法提取藕节中总黄酮，通过单因素和正交度，计算藕节中总黄酮提取率。试验，探究藕节中总黄酮提取工艺的较佳试验条Cn=C×V÷，／％：lOO

6、C0÷(2．000×件，旨在为从藕节中黄酮类化合物的提取和开发利1000)×100。用提供数据参考。式中，藕节中总黄酮的含量，c为稀释后浓度，C为原提取液浓度O1材料与方法1．2．2总黄酮提取液对羟自由基的清除活性1．1原料、试剂与仪器参照Fenton反应体系。若向该体系中加入藕干藕节(楚雄同济堂一中店，产地昆明)粉节提取液，与水杨酸竞争·OH，导致有色络合物收稿日期：2013．114)1基金项目：云南省应用基础研究项目(2012FD050)；楚雄师范学院科学研究基金项目(11YJGGO1)作者简介：李会端(198

7、3一)，女，讲师，博士，研究方向为天然食品化学成分分析及应用研究。E．mail：lhd08@cxtc．edu．cn。囡澎江唇J-：千学2014年第3期生成量减少。固定反应时间，在510nm处测量藕为0．15mg·mL的70％的乙醇，分别调节pH值节提取液的D值，与空白液对照，测定藕节中总为3．50，4．00，4．50，5．00，5．50，6．50，在50黄酮对·OH的清除率。清除率计算公式：cc恒温水浴中酶解1．5h。·OH的清除率／％：(D0一D+D。)÷1．5．4酶解时间对总黄酮提取率的影响D0×100。向6支

8、圆底烧瓶中各加入12mL纤维素酶浓度式中，D。为空白对照溶液吸光度，D为提取为0．15mg·mL的70％乙醇，调节pH值为液吸光度，D。为不加H：0提取液的本底吸光度。5．O0，在50℃恒温水浴中分别酶解0．5，1．0，1．3芦丁标准曲线绘制与线性关系考察1．5，2．0，2．5，3．0h。准确称取干燥的芦丁样品0．0100g，用70％1．6正交试验乙醇充分溶