不同提取方法的铁线莲属叶片总DNA提取效果-论文.pdf

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1、应用研究doi：10．13360／j．issn．1000-8101．2014．02．004不同提取方法的铁线莲属叶片总DNA提取效果盛璐，张逢凯，潘婷，季孔庶(南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室，南京210037)摘要：以铁线莲属植物的叶片为材料，采用CTAB—SDS法、简易CTAB法、改良CTAB法等3种提取方法，比较耗时、纯度、得率、浓度和质量等指标，以期为铁线莲属植物叶片总DNA的提取筛选适宜方法。结果表明，在纯度和浓度方面CTAB—SDS法>简易CTAB法>改良CTAB法，在节省提取时间方面改良CTAB法>CTAB—SDS法>简易CTAB法。以

2、CTAB—SDS法所提取的9种铁线莲DNA为模板，进行PCR扩增，CTAB—SDS法提取的DNA得率高、质量好，PCR扩增成功率也较高。综合比较，采用CTAB—SDS法进行铁线莲属叶片总DNA提取效果更佳。关键词：铁线莲；基因组DNA；提取方法；CTAB—SDS；简易CTABEfectofdiferentmethodsonDNAextractionfromleavesofClematisL．／／SHENGLu，ZHANGFengKai，PANTing，JIKongShuAbstract：Inordertoscreentheidealmethodtoextractgenom

3、icDNAfromtheleavesofClematis，9speciesoftheClematiswereusedastheexperimentalmaterialinthisstudy．DependingupontheindexofDNApurity，yield，concentrationandtimeconsuming，threemethods，CTAB—SDS，simplifiedCTAB，modifiedCTABwascomparedtoachievetheoptimalone．Theresultsshowedthatintherespectofpurity，y

4、ield，concentration，theorderfromhightolowqualitywasCTAB-SDS，simplifiedCTABandmodifiedCTAB，respectively；andthetimeconsumingorderfrommoretolesstimewasthemodifiedCTAB，CTAB-SDS，andsimplifiedCTAB．ThequalityofgenomicDNAextractedbyCTAB-SDSwasbetterthanothersforPCRamplificationtemplatepreparing．In

5、conclusion，theCTAB-SDSwasthemostsuitablemethodforgenomicDNAextractionfromtheleavesofClematis．Keywords：Clematis；genomicDNA；extractionmethod；CTAB—SDS；simplifiedCTABFirstauthor’Saddress：KeyLaboratoryofForestGenetics&Biotechnology，MinistryofEducation，NamingForestryUni—versity，Naming210037，Chi

6、na铁线莲属(ClematisL．)隶属于毛茛科，是一种观上也有广泛应用，因其具有抗肿瘤作用而使该属植物赏价值高、具有多种抗逆性的藤本植物，全世界约有备受关注。230—355种，广泛分布于除南极洲外的各大洲1-2]。基因组DNA的提取是植物分子生物学研究的基我国有铁线莲属植物140多种，全国各地均有分布，础技术。获取高质量的DNA是进行限制性酶切、大部分种类分布于华中和西南地区。本属中，多数植PCR扩增、分子杂交、遗传多态性分析以及基因组学物花形新颖别致，变化大，花朵色泽调和，独具风采；等分子生物学研究的基础。由于植物中次生代谢产花期较长，适应性强，并具有较强的耐寒性，园

7、艺用途物如多酚类化合物可导致DNA降解，并且多糖的污广泛，观赏价值高，是非常优良的垂直绿化材料，有着染也会影响植物DNA纯度，多糖能抑制限制性内切藤本皇后的美称，在国际观赏园艺中占有重要地酶、连接酶以及DNA聚合酶等酶类的生物活性。因位J。此外，该属植物自古就以其药用价值而被广此从富含多酚和多糖的植物组织中分离获得高质量泛使用，如《开宝本草》中记载的传统中药威灵仙和的基因组DNA并不是简单的事。目前植物基因组川木通及《新修本草》中记载的女萎。我国原产的铁DNA提取常用的方法有CTAB法、SDS法、氯化苄法、线莲属植物中可供药用