鳗源嗜水气单胞菌β—溶血素基因的克隆及表达

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第27卷第2期水产学报Vo1．27，No．22003年4月JOURNALOFFISHERIESOFCHINAApr．，2003文章编号：1000—0615(2003)02—0124—07鳗源嗜水气单胞菌I]1．溶血素基因的克隆及表达龚晖，林天龙，俞伏松，董传甫，陈日升，杨金先，陈振海(福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福建福州350003)摘要：应用PCR技术，从1株鳗源嗜水气单胞菌ML316中扩增得到溶血素基因AHL316HEM，将AHI．316HEM克隆到pGEM-TEasyV

2、ector，经分析验证后重组到pcDNA3．0中，构建了重组质粒PDLH。转化重组质粒PDLH的大肠杆菌(Escherichiacoli)DI-ISa能在血琼脂培养皿中形成明显的溶血斑，重组菌纯化的胞外产物溶血价为1．28×lO4HU·mg～，同时重组菌的胞外产物能被原始菌株的高免血清特异性地识别。结果证实，克隆到鳗源嗜水气单胞菌溶血素基因，重组质粒PDLH能够表达具有天然生物学活性的溶血素，为构建嗜水气单胞菌核酸疫苗奠定了基础。关键词：嗜水气单胞菌；溶血素基因；克隆；表达中图分类号：Q78文献标识码：ACI~lonminga

3、ndex1p：ress"intgoftheP．●hnemolysilngeneofAeromonashydrophilastrainisolatedfromAnguiUaanguiUaGONGHui，LINTian-long，YUFu-song，DONGChuan—fu，CHENRi—sheng，YANGJin-xian，CHENZhen-hai(A，IHusbandryandVeterinaryMedicineInstitute，FlAcademyAgfSC~eS，Fu*l~u350003，China)Abstract：Wi

4、ththetechnologyofPCR，thecompletedp-hemolysingeneAHL316HEMwasobtainedfromtheamplificationofallAeromonashydrophilastrainML316(isolatedfromdiseasedA池anguilla)．1hegeneWasclonedintopGEM-TEasyVector．Afteranalysis，thegeneWasinsertedintopcDNA3．0vectortoconstructtherecombina

5、ntplasmidPDLH．nIeE．colDH5awithPDLHcouldleadtoobviouse．hemolvrsisplaqueinblood-Agar．nIehemolysisactivityofcrudepurifiedtransfohnant’Sextracellularproducts(ECP)Was1．28X104HU‘mg_。．Furthermore，tlletransformant’SECPcouldberecognizedbyanti．seruiilwhichWasraisedagainstorig

6、inalbaqterialstrain．Theaboveresultsdemonstratedthatthep-hemolysingeneofML316hadbeenclonedandtherecombinantplasmidPDLHcouldexpresstheproductwithnativebiologicalfunction．nIeSUCCESSofcloningandexpressingthep-hemolysingeneofA．hydrophilawillspe~．,dupthedevelopmentofDNAva

7、ccineagainstA．hydrophila．Keyword：Aeromonashydrophila；p-hemolysingene；cloning；expression嗜水气单胞菌是导致鱼类暴发性疾病的主要致病菌之一[一。目前嗜水气单胞菌病的防治仍以收稿日期：2002-05．27资助项目：国家863资助(2001AA622050)~41福建省科技项目资助(2000Z077)作者简介：龚晖(1971一)，男，福建建瓯人，助理研究员，主要从事水产养殖动物病原微生物研究。Tel：0591—7817514．E-mail：ghxf

8、@sina．corn维普资讯http://www.cqvip.com2期龚晖等：鳗源嗜水气单胞菌溶血素基因的克隆及表达125使用化学药品为主，化学药品的大量使用，导致病原菌广泛耐药，药物残留威胁着人类健康。嗜水气单胞菌病的免疫预防工作已成为鱼病学者关注的焦点，嗜水气单胞菌菌体