COBAS TaqMan v 2.0检测HBV DNA结果比较-论文.pdf

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1、·398·临床检验杂志2014年5月第32卷第5期ChinJClinLabSci，May．2014，Vo1．32，No．5DOI：10．13602／j．cnki．jcls．2014．05．20·产品应用研究·国产荧光定量PCR与COBASAmpliPrep／COBASTaqManv2．0检测HBVDNA结果比较倪俊明，孙梅，吴旭平(南京市第二医院／东南大学附属第二医院肝病研究室，南京210003)摘要：目的针对不同HBV分型，比较某国产实时荧光定量PCR试剂与Roche公司COBASAmpliPrep／CO

2、BASTaqManv2．0试剂检测HBVDNA的结果。方法根据HBV分型结果，抽取72份慢性乙型肝炎患者血清标本，用Roche公司COBASAm—pliPrep／COBASTaqManv2．0(试剂A)和某国产实时荧光定量PCR(试剂B)对72份慢性乙型肝炎患者血清标本进行HBVDNA定量检测，以分析针对不同HBV分型样本，国产试剂与试剂A的相关性。结果试剂A和B测得的HBVDNA结果(IU／mL)以10为底数取对数分别为5．674-1．67和5．724-1．75，两者结果差异无统计学意义(P>0．05)。

3、共检测72份样本，其中63例A、B两种试剂检测结果有数值。此63例总相关系数(r)为0．94(P<0．01)，试剂A与试剂B对63例样本中HBV基因型B型、C型和B／C混合型样本检测结果r分别为0．94、0．95和0．92(P<0．05)。对于HBVDNA定量结果<10IU／mL标本，试剂B与试剂A相关性较低(r=0．31，P=0．35)。结论对于不同的HBV基因型，试剂B与试剂A在检测HBVDNA方面有较好相关性，适用于HBVDNA的临床检测，但在低HBV载量时试剂B与试剂A相关性较低。建议结合临床诊治进

4、程和检测的效率及检测费用等因素，选择适当的检测试剂。关键词：乙型肝炎病毒；荧光定量PCR；HBV基因型中图分类号：R512．62文献标志码：AHBVDNA检测对确诊乙肝和评估乙肝治疗效1．4统计学分析用GraphpadPrism5统计软件果具有十分重要的作用J。目前多使用实时荧光进行。数据采用配对样本t检验以及Pearson相关定量PCR方法检测HBVDNA。Roche公司全自动性分析，P<0．05为差异有统计学意义。核酸分离纯化及检测系统COBASAmpliPrep／2结果COBASTaqMan及其配套试

5、剂是美国FDA和欧盟CE认可的HBVDNA定量检测方法。本文分别用2．12种试剂HBVDNA定量结果比较72份标国产HBVDNA荧光定量PCR试剂盒和Roche公司本中有63份2种试剂检测均有数值报告，其余9份COBASAmpliPrep／COBASTaqMan系统，同时检测至少1种试剂低于检测下限故无数值报告，需另作HBV感染者血清，评价这两种方法的可比性。分析。63份有数值结果的标本取以10为底数的对数后进行了总体分析，试剂A和B的检测结果分别1资料与方法为5．674-1．67和5．724-1．75，采

6、用配对t检验，试1．1研究对象从本科室2009～2013年间已检测剂A与B结果差异无统计学意义(t=0．58，P>HBV分型的临床血清样本中随机选择72例，置于0．05)。试剂A和试剂B检测结果相关系数r=一80℃冻存。0．94(P<0．01)。见图1。1．2主要仪器和试剂COBASAmp1iPrip／C0BASTaqmanHBVDNAv2．0(试剂A，Roche分子诊断公司)，国产实时荧光定量PCR(试剂B，上海科华公嘏司)，ABI7300型荧光定量PCR仪(美国AppliedBi-∞幕osystems公

7、司)。试剂B采用煮沸法而试剂A采用磁珠法提取核酸，且试剂A具有内标。1．3血清HBVDNA定量检测对72例血清样本02468分别用试剂A(灵敏度20IU／mL，线性范围20试剂A结聚IU／mL～1．7×10IU／mL)、试剂B(灵敏度500图1试剂A和试剂B检测结果(以10为底数取对数)相关IU／mL，线性范围500IU／mL～1．0×10IU／mL)检性分析测病毒载量，严格按实验室操作规程操作。作者简介：倪俊明，1986年生，男，硕士研究生，主要从事病毒性肝炎相关研究。通信作者：吴旭平，副主任技师，博士，

8、E—mail：xuping—wu@126．COB。临床检验杂志2014年5月第32卷第5期ChinJClinLabSci，May．2014，Vo1．32，No．5·399·2．2HBVDNA载量对检测结果的影响按照试剂性)及扩增效率，以消除反应体系中的干扰因素。国A的病毒载量结果，将72例标本分为3组：<10产荧光定量PCR试剂品种很多，试剂B使用煮沸法IU／mL组、10～10。IU／mL组和>10。IU／mL组