临床微生物学检验(sop).doc

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1、临床微生物学检验(sop)临床微/]:.物学检验(sop)确保高压效果的可靠性。【适用范囤】蒸气式高压锅。【该SOP变动程序】木标准操作程序的改动，可由任一使用木SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。【操作方法】1•将水加到制压锅部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科日期06年06月06口确保培养箱温度恒定。【适用范围】各种类型隔水式、温度设定为27°c、35°C、42°C、56°C培养箱。【该SOP变动程序】木标准操作稈序的改动，可由任一使用木SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专

2、业主管、科主任。【操作方法】1•培养箱应放置于水平地面(或坚固的水平台)，电源电压须匹配。2.从注水口先将隔水箱部门卞管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科口期06年06月06保证培养基的质量。【适用范围】使川成品培养基干粉制备备种分离培养基。【该SOP变动稈序】本标准操作程序的改动，可由任一使用木SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。【步骤】1.在玻璃容器屮加入所需蒸馆水的二分Z—量，然后放入一定量培养基干粉，补足水量，轻轻搅拌以促进溶解。2.校正pH：高压灭菌前可用pH计或精密pH试纸校正培养基

3、的pHo3.分装：液体培养基一•般在火菌前分装，分装时应注意每管的分装量不应高于试管的2/3。琼脂平板是在培养基高压灭菌后冷至50-600C时再倾注平板。4.质量检杏[1]无菌试验：将制好的培养基在350C孵育过夜，判定是否灭菌合格。[2]效果检验：按不同的培养要求，接种相应的菌种，观察细菌的发育、菌落形态、色素、溶血等特征，判断培养基是否符合要求。5.保存：液体培养基及琼脂平板须在40C保存,一般不超过7天,如用槊•料袋密封至多保存2周。操作人员部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科口期06年06月06

4、_1确保染色

5、结果清晰可靠。【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用木SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。【试剂】1.结晶紫溶液A液：结晶紫2g95%乙醇20mlB液：草酸钱0.8g蒸馄水80ml使用前24小时将A液B液混合后，过虑后装入试剂瓶lg碘化钾2g蒸憎水300ml3.脱色液：95%乙醇4•复染液储存液：沙黄2.5g95%乙醉100ml应用液：储存液10ml蒸馆水90ml【方法】1.待检标木用无菌生理盐水涂片，经白然干燥或火焰固定。2.加结晶紫液染1分钟，清水冲去染液。3.加碘液染1分

6、钟，清水冲去染液。4.加95%乙醇脱色液，不时摇动约10・30分钟，至紫色已脱落为至，水冲洗。5.加复染液（伊红），染30分钟，水冲洗。6.待涂片H然干燥后，油镜镜检。操作人员部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科口期06年06月06U确保染色结果清晰可靠。【方法】（一）碱性复红染色法【试剂】1、萋纳石炭酸复红溶液碱性复红乙醉饱和溶液10ml5%石炭酸溶液90ml2、脱色剂浓盐酸3ml95%乙醉97ml3、复染液（吕弟勒美蓝液）美蓝乙醇饱和溶液30ml10%氢氧化钾0.1ml蒸馄水100ml【染色步骤】1、涂片经白然干

7、燥或火焰固定麻，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。染5分钟（若染色奴卡菌需要加长时间），水洗。2、加脱色剂，不时摇动坡片至无红色脱落为至，水洗。3、加复染液，染0.5・1分钟。4、干后镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。注：奴卡菌、放线菌标木染色时，脱色剂改用2%硫酸水溶液。（二）金胺O•罗丹明B染色法【染剂】1、罗丹明B液：罗丹明BO.lg加蒸锢水100ml；2、0.1%金胺O液：金胺OO.lg加蒸馆水95ml,再加入纯石炭酸5ml,混匀。3、3%盐酸酒精。4、稀释美蓝液：吕架勒美蓝液10ml,加熬馆水

8、90ml,混匀。【方法】1、涂片固定后加第1液30・90分钟。2、弃去第1液后加第2液染15分钟。3、用第3液脱色1・2分钟，水洗。4、滴加第4液染30分钟，水洗，待干，荧光镜检。【结果】抗酸菌在暗背景屮呈现金黄色荧光。操作人员部门主管质量负责人检验科口期姓名唐玉贞检验科06年06月06日指导血液标木的正确采集。【该SOP变动程序】木标准操作程序的改动，可由任一使用木SOP的丁•作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。【步骤】1.选择一适当的静脉穿刺处，先以70%酒精擦拭。2.再用棉签沾取2%碘酊涂于欲作静

9、脉穿刺处，让其干后再用70%酒精擦拭。3.全部手续再作一此（如必要）4.用一支无菌的21号针头与10ml针筒抽空（成人约抽取10ml血液,小孩约抽取l-5ml）05.血液抽出后，立即注入血液培养瓶，马上充分混匀后，再送入检验。操作人员部门主管质量负责人姓名唐玉贞检验科检验科日期06年06月06LI保证血（骨髓）培养结