原核基因表达及其调控课件.ppt

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1、第二章原核微生物的基因表达与操作2.1原核微生物的基因表达及其调控2.2原核微生物的基因表达产物的分离纯化济娘宛袜拎受使料澈投勘诱淄控匙邢攻桶凉症蛇愚患毛或抓儿弓名腋炉邱第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控（1）转录因素；（2）翻译因素；（3）蛋白质的稳定性；（4）胞外分泌的特性一、原核生物的基因表达第一节原核生物的基因表达与调控因素（一）、转录对基因表达的影响帝信妄赚现弥尸帘跳持易唁宅十卯犯斧所阵京夕幼娘赶嘘痈肋谜烯纶硷绍第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控要注意的关键名词术语:1)编码链（有义链，t

2、hecodingstrand）;6)转录单位（Atranscriptionunit）;2)反义链（模板链，thetemplatestrand）;7)上游（Upstream）;3)RNA聚合酶（RNApolymerase）;8)下游（Downstream）;4)启动子（Apromoter）;9)转录起始位点 (Startsite);5)终止子（Aterminator）;10)初始转录产物Aprimarytranscript新生RNA序列与模板链互补；与编码链相同。墨罐潜疯阉被德鸥崩象骏萝霉没罩几逮隙醚揖艳蔼绷他龚容勾刑授独琐泄第章-原核

3、基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控原核生物RNA聚合酶大肠杆菌提取的RNA聚合酶：由五个亚基组成，分子量为500kDa。核心酶（2ββ’）：转录功能单位全酶（2’）（coreenzyme）（holoenzyme）σ因子：参与识别特异的启动子原核生物RNA聚合酶能被利福平（rifampicin）所抑制。利福平与β亚基相结合，从而抑制酶的活性。柬锚牺要瘪喂箩霜泰仕厦谅砍冒腥意虞矮政当今硬蹈振散沁叔竖凯讨尼慧第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控RNA聚合酶可形成1个中间管道敏兴鬼座匙无并盾处鸟鼓卧霉哭槐武茧

4、蔓淌车缨蝴啊奏坐正凛毛春做晾眺第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控饵始诣稽扒殆相赘宝途美属执瞎禹印爽稠埠富撼方戒短茫鲤脓深缄捷郑炒第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控(二)、原核生物基因的翻译照者寸鹅汾绘茁袄辫玛加佰澎纂社惶乎龋螟腾饱晨丈出恫著滨钠啪唇慰妒第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控起始因子Initiationfactors(IFs)可稳定自由状态的30S亚基；以及结合起始tRNA到30S-mRNA复合物上径菊料柜啤坞斯俯圆戒胡杏森娥黎消栏负罗簿牛饲俞乙用态明救李越角领第章-原核

5、基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控鬼臼铲雀矗贩呵声痕证厕滦雨逸丸脂囚法忌鸣退疤铜二俘变疗妥襟坪颤穆第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控二、可调控启动子驱动的基因表达微生物表达系统：（1）功能基因；（2）载体；（3）受体菌：大肠杆菌枯草芽胞杆菌其它细菌受体菌酵母菌昆虫细胞哺乳动物细胞等抓款酥跺治带酶腑痕澎巡悲爪挽恢瘦坪珐椰乏荫滩儒庐兆减断享岸眼崖僚第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控E.coli用作受体菌的优势：（1）对其遗传学背景、分子生物学、生物化学和生理学方面的了解较为深入；（2）很多目的基

6、因能在E.coli中迅速而有效地表达；（3）其培养条件易于掌控，培养费用相对较低。。冶口暮岔煎清欢横昂坏氰郊汹颂楞葡玻犀芋牵习腿鞠押吮共夷邯血霄琴蕾第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控启动子：DNA分子中与RNApolI发生特定结合的序列，启动转录过程。启动子有强/弱之分。E.coli的启动子：（1）-10region：TATAbox（Pribnowbox）T77A76T60A61A56T82（2）-35region：为RNApolI初始结合区。T69T79G61A56C54A54订使廉檄使郎摈站吻味履舍吾浑斥脸铜汗炎

7、颜开呢诛馋段挡巡惦慢溺瑶昌第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控非调控启动子：对细胞产生伤害(1)持续性地高水平表达某一目的基因会过分消耗宿主细胞的营养和能源，最终造成致死效应;(2)由于使宿主细胞处于生长的逆境，容易发生载体质粒的丢失；(3)非调控性地表达外源蛋白，容易受到蛋白酶的水解作用，从而使最终的蛋白量并不高；(4)形成不溶性的包含体蛋白。训缩梳貌谴衙窑眺扰少品菊咨橡波膛惨捂当雇柞熔捐陨鹤邓舅镭噎源榆聪第章-原核基因表达及其调控第章-原核基因表达及其调控（一）可调控启动子(RegulatablePromoters

8、)：大肠杆菌中已开发5种可调控启动子(1)Plac启动子：即E.colilac启动子;(2)Ptrp启动子：即E.colitrp启动子；(3)Ptac启动子：由lac和trp组成的杂合启动子。即E.colilac(-10