β-防御素-5 mRNA在荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞中的表达.pdf

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1、分类号S852.1学校代码10129UDC577学号08201057β-防御素-5mRNA在荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞中的表达TheExpressionofβ-Defensin-5mRNAinMammaryEpithelialCellsofHolsteinCows申请人：凃勇学科门类：农学学科专业：基础兽医学研究方向：动物组织胚胎与发育生物学指导教师：曹贵方教授论文提交日期：二〇一一年四月摘要奶牛乳腺炎是一种复杂的综合性乳腺疾病。它病因复杂，可由多种病原微生物侵入乳腺而引起，所以防治不易。目前，关于β-防御素的抗乳房炎作用的研

2、究很少。本研究首先采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择消化法，对荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行了分离、培养和纯化，并利用形态学、核型分析和荧光定量RT-PCR检测α-酪蛋白等方法对所培养乳腺上皮细胞进行了鉴定。随后，通过添加代表大肠杆菌为主要侵染力的脂多糖（LPS）建立了实验性乳房炎的乳腺上皮细胞模型，并采用实时荧光定量RT-PCR方法检测乳腺上皮细胞中细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α及α-酪蛋白和β-防御素（BNBD5）mRNA的表达水平。研究结果显示，添加LPS后乳腺上皮细胞中炎性因子IL-6、IL-12和TNF-α的m

3、RNA表达量与空白对照组相比显著增加（p<0.01），并且α-酪蛋白mRNA表达量显著降低（p<0.01），说明添加LPS诱发上皮细胞产生了一定的炎性。并且添加LPS刺激乳腺上皮细胞后，乳腺上皮细胞中BNBD5mRNA的表达量存在着时间和剂量效应，并表现出一定的规律。当脂多糖终浓度为300ng/mL并培养48h后BNBD5的表达量最高，与空白对照组间存在极显著差异（p<0.01），推测BNBD5基因可能参与了由LPS诱发的奶牛乳房炎的防御机制。本研究结果将为进一步研究β-防御素的抗乳房炎作用奠定基础。关键词：乳腺上皮细胞；

4、BNBD5；脂多糖；mRNA表达TheExpressionofβ-Defensin-5mRNAinMammaryEpithelialCellsofHolsteinCowAbstractCowMastitisisacomplexandcomprehensivebreastdisease.Itcanbecausedbymanypathogenicmicroorganismsinvadingmammarygland,soitisdifficulttopreventCowMastitis.Currently,theresearch

5、esthatusingβ-defensintotreatmastitisarerare.Firstly,inthisstudy,weusedcollagenasedigestionandtrypsinchosendigestionmethodtoisolateandpurifybovinemammaryepithelialcells.Afterthat,establishingmammaryepithelialcellsmodelofexperimentalmastitisbyaddingLPSproducedmainly

6、byE.coliinfection.Andreal-timePCRwasusedtodetectthelevelsofmRNAexpressionofsomecytokineinmammaryepithelialcellsincludingIL-6,TNF-α,α-caseinandBNBD5.TheresultsshowthatthemRNAexpressionofinflammatoryfactorIL-6,IL-12andTNF-αinmammaryepithelialcellswerenotablelyup-reg

7、ulated(P<0.01)comparedwiththecontrolgroupandthemRNAexpressionofα-caseinwasmarkedlydown-regulated(P<0.01),whichillustratedthatadditionofLPSinducedcertaininflameinepithelialcells.Furthermore,theexpressionofBNBD5wasatthehighestlevelwhenmammaryepithelialcellsweretreat

8、edby300ng/mLLPSfor48hours,andtherewassignificantdifference(P<0.01)comparedwiththecontrolgroup.TheresultsconfirmthatBNBD5mayparticipateinthedefensemechan