实验五、六 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响

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1、教案首页第__10__次课授课时间：2007年1月2日～1月5日课程名称生物化学与分子生物学实验课年级2005专业、层次临床医学本科授课教师符伟玉职称讲师课型(大、小)小学时4授课题目（章、节）实验五胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响实验六葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖基本教材或主要参考书自编《生物化学与分子生物学实验指导》教学目的与要求：1、观察胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响。2、掌握血糖浓度的测定方法。3、掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理和方法。4、掌握血糖浓度的正常参考值，了解血糖测定的

2、临床意义。大体内容与时间安排，教学方法：小结上次实验:PCR扩增5min1、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的原理5min2、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的注意事项5min3、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理5min4、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的操作改动及注意事项5min5、学生做实验135min教学方法：实验+示教教学重点、难点：重点：1、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理2、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项难点：葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项教研室审阅意见：教研室主任签名：年月日3基本内容辅

3、助手段和时间分配一、实验原理（一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响激素是调节机体血糖浓度的重要因素。胰岛素能降低血糖，肾上腺素等激素能升高血糖。本实验给两只家兔分别注射胰岛素或肾上腺素，取注射前、后兔的静脉血，测定血糖含量，观察注射前后血糖浓度变化，从而了解胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响。（二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖本实验是葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化物酶(POD)相偶联发生的偶联反应。第一步：葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。第二步：过氧化物酶在色原性氧受体存在时将

4、过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物(苯醌亚胺非那腙)。二、操作步骤（改动）（一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响（二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖P9表下改为：混匀，置37℃水浴中，保温15min，加2ml水混合后在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。三、注意事项（一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响1、剃兔耳毛时，先用水润湿后在剃毛，要求耳缘静脉四周要剃干净，否则取血时易引起溶血；2、选用腹部皮肤作胰岛素和肾上腺素皮下注射，一手轻

5、轻提起腹部皮肤，另一手持注射器以45°进针，针头不要刺入腹腔，更不要穿破皮肤注射到体外。（二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖1、最后加酶酚混合试剂，各管反应时间应一致；2、因用血量甚微，操作中应直接加样本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠；3、葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量；4、严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。5min示意图5min化学反应式流程图5min示教5min示教实验+示教100min3小结葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度

6、的线性范围至少可达22.24mmol/L，回收率94%～105%，批内CV为0.7%～2.0%。批间CV为2%左右，日间CV为2%～3%。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较，73份标本葡萄糖氧化酶法均值为8.31mmol/L，已糖激酶法均值8.21mmol/L，相关系数为0.9986，回归方程y=1.0026x－2.29。本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而

7、消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达10g/L，黄疽标本胆红素浓度达342μmol/L，维生素C小于30mg/L，均不影响测定结果。氟化钠浓度达2g/L不干扰测定结果。标本中含尿素浓度达46.7mmol/L，尿酸浓度达2.95mmol/L，肌酐浓度达4.42mmol/L。半胱氨酸浓度达3.30mmol/L，甘油三酯浓度达5.6mmol/L，胆固醇4.40mmol/L，对测定结果均无显著影响。左旋多巴100mg/L，维生素C5mg

8、/L以上，谷胱甘肽100mg/L时，可引起负误差；半胱氨酸达10mmol/L时，产生相当0.72mmol/L葡萄糖的正误差。复习思考题、作业题葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量；而且严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。为什么？下次课预习要点实施情况及分析3