最新C型肉毒梭菌毒力基因.8.ppt课件.ppt

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1、C型肉毒梭菌毒力基因.8.申请理由：本人及本组成员对微生物学有着无比的热情和浓厚的兴趣，动手能力强、善于思考和钻研。并且已经具有研究该项目所必须的相应知识，对于肉毒梭菌的致病原理和致病因子有所了解。具有熟练操作基本仪器的能力，具有开拓进取的精神，同时也具有一定的创新能力。二、肉毒梭菌的分类及中毒类型根据肉毒毒素的抗原属性可分为7血清型，分别命名为A-G型，其中A、B、E、F型引发人类肉毒中毒，C、D型引发动物、禽类肉毒中毒，G型引起中毒的报道较少。肉毒中毒主要有3种类型：①动物性肉毒中毒；②婴儿肉毒中毒；③创伤性肉毒中毒，类似于破伤风。易含肉毒素的食

2、品在美国以罐头发生中毒较多，日本以鱼制品较多，在我国主要以发酵食品为主，如臭豆腐、豆瓣酱、面酱、豆豉等；特别是不经加热处理而直接食用的食品。为什么选择这个题目在国内对肉毒梭菌的研究中多以研究A型肉毒梭菌的毒力基因，对A型肉毒梭菌的毒力基因的克隆、表达技术趋于成熟；而对于C型肉毒梭菌的研究一直处于C型肉毒梭菌中毒的研究报告和C型肉毒梭菌毒素的灭鼠效果的研究阶段。对于C型肉毒梭菌的基因研究的甚少，鉴于以上原因开展了该项课题的研究。研究项目的意义研究肉毒梭菌毒素基因，可以克隆肉毒毒素基因，提纯C型肉毒毒素，通过单克隆抗体技术产生C型肉毒素抗毒素，为人类因误

3、食含有肉毒素的食物而中毒的急救奠定一定的基础，通过肉毒梭菌毒力基因的表达产物的单一性和单克隆抗体技术的运用，可以进一步研究出肉毒素的检测试剂盒，为食品的安全提供一定的保障；也可以为肉毒毒素的生产和应用提供一种新的途径。研究内容C型肉毒梭菌毒力基因的克隆与原核表达研究方法（1）实验材料及试剂：C型肉毒梭菌、10×buffer、6×buffer、Taq酶、DNTP、PCR水、pMD18T载体、T4连接酶、原核表达载体pET-28等。（2）实验仪器：PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、紫外分析仪、隔水式恒温培养箱、CO2培养箱等。（3）步骤：①肉毒梭菌

4、的扩大培养；②提取肉毒梭菌基因组；③设计毒力基因引物并进行PCR；④PCR扩增目的基因纯化后与pM18-T连接转化DH5a；⑤测序及进行分析；⑥构建原核表达载体进行原核表达.实验方案：（1）C型肉毒梭菌的增菌培养；（2）C型肉毒梭菌毒力基因选取及相对应引物设计；（3）C型肉毒梭菌毒力基因的克隆和分析。（4）原核表达载体的构建和原核表达.技术路线：C型肉毒梭菌菌种C型肉毒梭菌的增殖培养离心得到菌体提取基因组选取毒力基因进行引物设计后PCR获得目的基因后纯化后与pMD-18T连接转化DH5aPCR鉴定和酶切鉴定后送测序革兰氏染色鉴定构建pET-28原核表

5、达载体序列分析原核表达项目创新点：C型肉毒梭菌毒力基因的克隆项目特色：1、C型肉毒梭菌毒力基因的克隆；2、为C型肉毒梭菌PCR快速检验奠定基础。解决的关键技术：C型肉毒梭菌外毒素基因的获得；C型肉毒梭菌外毒素基因克隆；毒力基因的原核表达项目进度安排2011年10月-2012年10月完成资料的查阅、C型肉毒梭菌外毒素基因引物的设计和基因的克隆、测序及序列分析2012年10月-2013年10月完成C型肉毒梭菌毒素基因的原核表达项目预期成果项目预期成果可分为三个部分：获得C型肉毒毒素基因的克隆；C型肉毒毒素基因的原核表达产物；发表论文1-2篇。实现本项目预

6、期目标已具备的条件参加本项目的人员都有扎实的理论和实验操作基础，钻研的恒心，坚定不移的信念。最重要的是我们有共同的兴趣爱好，共同的目标以及广阔的知识面，精心搜集准备的相关材料。同时塔里木大学研发中心及动物科学学院实验室能够为本项目提供相应的仪器设备。学校提供条件希望动物科学学院实验室向课题组提供相关的仪器设备及常用药品。并希望得到指导老师精心的指导，严格的要求。如果学校能向课题组提供2000元的研究经费，将为此课题的展开带来很大的便利。经费预算（合计2000元）科研业务费400元实验材料费900元仪器设备费500元其他费用200元谢谢大家常见急危重症

7、的诊断23一、常见急危重症的范畴24急危重症---通常指患者的脏器功能衰竭，包括“六衰”；衰竭的脏器数目越多，说明病情越危重（两个以上称“多脏器功能衰竭”），而最危重的情况莫过于心跳骤停。1、脑功能衰竭：如昏迷、中风、脑水肿、脑疝形成、严重脑挫裂伤、脑死亡等。252、各种休克：由于各种原因所引起的循环功能衰竭，最终共同表现为有效血容量减少、组织灌注不足、细胞代谢紊乱和功能受损的一组综合征。263、呼吸衰竭：包括急性与慢性呼吸衰竭，根据血气分析结果又可分为Ⅰ型呼衰（单纯低氧血症）、Ⅱ型呼衰（同时伴有二氧化碳潴留）。4、心力衰竭：如急性左心衰竭（肺水肿表

8、现）、慢性右心衰竭、全心衰竭和泵衰竭（心源性休克）等。275、肝功能衰竭：表现为肝昏迷，包括急性肝坏死和慢性