最新基因工程工具课件教学讲义ppt课件.ppt

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1、基因工程工具课件基因工程培育抗虫棉的简要过程：苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因与运载体DNA拼接导入棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)表达基因工程基础：（1）物质基础：DNA的规则双螺旋结构；（2）理论基础：不同生物共用一套密码子；（3）技术基础：运载体和工具酶的发现。什么叫黏性末端？被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。T磷酸二酯键1234512345A限制酶的识别序列：切割DNA分子时产生的两种不同末端限制酶的识别特点以中轴线双侧的DNA上碱

2、基呈反向对称，重复排列如：GAATTCCCCGGGCTTAAGGGGCCC一、限制性核酸内切酶⒈主要来源：⒉种类与命名：约4000种⒊作用特点：4.限制酶识别序列5.作用结果：识别特定核苷酸序列原核生物产生黏性末端或平末端Goon,切断磷酸二酯键具有特异性大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成二、“分子缝合针”——DNA连接酶①作用:把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来.②作用原理：催化磷酸二酯键形成可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coli

3、DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低T4DNA连接酶质粒目的基因限制酶处理一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶表达载体同一种1.过程DNA聚合酶DNA连接酶区别1区别2相同点DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么?1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段（引物）上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸

4、二酯键连接成一条互补的DNA链2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板类型E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)相同点差别DNA连接酶的种类作用将外源基因送入受体细胞。常用的运载体质粒噬菌体动植物病毒等基因的运输工具——运载体①质粒本质：独立于拟核或细胞核之外的小型双链环状DNA分布：许多细菌、酵母菌等生物特点：能自主复制、有限制酶切割位点和标记基因②最常用：大肠杆菌质粒常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基

5、因一起复制有切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别课本知识回顾基因工程又叫做或。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种提取出来，加以，然后放到另一种生物的细胞里，改造生物的遗传性状。基因拼接技术DNA重组技术基因修饰改造定向地“分子手术刀”──“分子缝合针”──“分子运输车”──限制酶DNA连接酶基因进入受体细胞的载体DNA连接酶1、种类：2、作用部位：两类E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶磷酸二酯键1．下列关于限制性核酸内切酶的叙述中，错误的是（）A．它能在特殊位点切割DNA分子B

6、．同一种酶切割不同的DNA产生的黏性末端能够很好地进行碱基配对C．它能任意切割DNA，从而产生大量DNA片段D．每一种限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列√练一练2．在基因工程中，切割质粒和含有目的基因的DNA片段，需要使用（）A．同种限制性核酸内切酶B．两种限制性核酸内切酶C．同种DNA连接酶D．两种DNA连接酶√练一练3．DNA连接酶的作用是（）A．使DNA子链和母链之间形成氢键B．使黏性末端之间形成氢键而相连C．连接DNA分子中脱氧核苷酸和磷酸之间的化学键D．以上都不对√练一练4下列关于基因工程的叙述，

7、不正确的是（）A、基因工程的原理是基因重组B、运用基因工程技术，可使生物发生定向变异C、一种生物的基因转接到另一种生物的DNA分子上D、是非同源染色体上非等位基因的自由组合练习D3.限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是一G↓GATCC一，限制性核酸内切酶Ⅱ的识别序列和切点是一↓GATC一。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。⑴请画出质粒被限制性核酸内切酶I切割后所形成的黏性末端。⑵请画出目的基因两侧被限制性核酸内切酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因

8、，现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么？请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论。对照组：不添加抗生素实验组1：添加一定浓度的四环素实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素练习对照组实验组1实验组2实验组3结论预期一＋＋＋＋预期二＋＋－－预期三＋－＋－预期四＋－－－对照组：不添加抗生素实验组1：添加一定浓度的四环素实验