大鼠透明质酸(ha)elisa说明书

《大鼠透明质酸(ha)elisa说明书》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、大鼠透明质酸(HA)酶联免疫分析ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用—北京奇松生物科技有限公司http://www.shiyanshiji.com产品编号：QS42052预期应用ELISA法定量测定大鼠血清、血浆以及蛋清和蛋黄中透明质酸（HA）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中透明质酸水平。用纯化的透明质酸结合蛋白(HABP)包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入透明质酸、生物素化的抗大鼠透明质酸结合蛋白（HABP）、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色

2、。颜色的深浅和样品中的透明质酸呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100nmol/L，做系列倍比稀释后，分别稀释成100nmol/L，50nmol/L，25nmol/L，12.5nmol/L，6.25nmol/L，3.12nmol/L，1.56nmol/L，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0nmol/L，临用前15分钟内配制。如配制50nmol/L标准品：取0.5m

3、l100nmol/L的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。2.样品稀释液：1×20ml/瓶。3.检测稀释液A：1×10ml/瓶。4.检测稀释液B：1×10ml/瓶。5.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。6.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。稀释方法同检测溶液

4、A。7.底物溶液：1×10ml/瓶。8.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。9.终止液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。标本的采集及保存1．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。2．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。3.大鼠蛋：分离蛋清和蛋黄，处理后的标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。，注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤实验开始

5、前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100ul（取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内

6、配制），37℃,60分钟。3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100ul，37℃，60分钟。5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。7.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终

7、止液。8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。注：1．每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。3.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶