2型糖尿病肾病患者血清Betatrophin水平的变化及意义

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分类号：学校代码：10114密级：学号：021530307硕士学位论文2型糖尿病肾病患者血清Betatrophin水平的变化及意义Therelationshipbetweenserumbetatrophinleversanddiabeticnephropathyintype2diabeticpatientsanditssignificance研究生：梁登耀指导教师：郭志新教授专业名称：内分泌研究方向：糖尿病及其慢性并发症学位类型：专业型所在学院：第二临床医学院中国山西二○一八年五月九日 分类号：R587.1学校代码：10114密级：学号：0215303072型糖尿病肾病患者血清Betatrophin水平的变化及意义Therelationshipbetweenserumbetatrophinleversanddiabeticnephropathyintype2diabeticpatientsanditssignificance研究生：梁登耀指导教师：郭志新教授专业名称：内分泌研究方向：糖尿病及其慢性并发症学位类型：专业型所在学院：第二临床医学院中国山西二O一八年五月九日 学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师郭志新指导下，本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉；4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：日期：年月日指导教师签名：日期：年月日（本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用） 目录摘要........................................................................................................................................................IAbstract....................................................................................................................................................III前言.......................................................................................................................................................1常用缩写词中英文对照表...............................................................................................................3研究对象与方法.......................................................................................................................................41.1研究对象....................................................................................................................................41.1.1入选标准：.......................................................................................................................41.1.2排除标准：.......................................................................................................................41.2研究方法....................................................................................................................................41.2.1临床资料收集..................................................................................................................41.2.2实验室检查指标检测......................................................................................................51.2.3血标本收集及保存..........................................................................................................51.2.4主要仪器设备及试剂......................................................................................................61.2.5实验方法..........................................................................................................................61.2.5.1血清betatrophin的ELISA检测原理.........................................................................61.2.5.2样本准备.......................................................................................................................61.2.6试剂准备..........................................................................................................................61.2.7检测程序..........................................................................................................................71.2.8结果计算..........................................................................................................................81.2.9试剂盒性能.......................................................................................................................81.3统计学方法.................................................................................................................................82结果.................................................................................................................................................92.1各组间一般临床资料及各生化指标的比较（见表2-1，表2-2）........................................92.2各组间血清betatrophin水平的比较（见表2-3，图2-1）....................................................92.3血清betatrophin与各指标的spearman相关分析（见表2-4）............................................92.4多元逐步回归分析血清betatrophin的影响因素（见表2-5）.............................................92.5Betatrophin与各指标的有序多分类Logistic回归分析（见表2-6）...................................92.6结果附表..................................................................................................................................113讨论...............................................................................................................................................164结论...............................................................................................................................................22参考文献.................................................................................................................................................23综述.........................................................................................................................................................281.Betatrophin概述...................................................................................................................................281.1Betatrophin与胰岛细胞增殖..................................................................................................281.2Betatrophin与脂代谢..............................................................................................................291.3Betatrophin与体重..................................................................................................................291.4Betatrophin与胰岛素..............................................................................................................302.糖尿病肾病概述..................................................................................................................................303.Betatrophin与糖尿病肾病..................................................................................................................314.小结......................................................................................................................................................32 参考文献.................................................................................................................................................33致谢.....................................................................................................................................................36在学期间承担/参与的科研课题与研究成果.........................................................................................37个人简历.................................................................................................................................................38 山西医科大学（博）硕士学位论文2型糖尿病肾病患者血清Betatrophin水平的变化及意义摘要目的：观察2型糖尿病患者糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）不同时期血清betatrophin的变化水平，为DN的早期诊断提供一定依据。方法：收集健康人群16例(A组)，2型糖尿病患者48例，将T2DM患者以UACR30mg/g及300mg/g为切点分为正常白蛋白尿组（B组）与微量白蛋白尿组（C组）、大量蛋白尿组（D组）各16例。统一测量所有受试者的人体基本参数，检测糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）、血脂、超敏C反应蛋白（HsCRP）、血肌酐（Cr）以及肾小球滤过率（GFR）等生化指标。采用免疫比浊法测定T2DM患者的尿白蛋白水平，酶联免疫吸附（ELISA）法检测所有受试者的血清betatrophin水平。结果：（1）与A组相比，T2DM组腰围、SBD、FPG、FINS、HbA1C、TG、TC、LDL、Cr、BUN、UACR均明显升高，HDL、GFR明显降低（P<0.05）。与A组相比，D组腰围、TG、Cr、BUN明显升高，GFR明显降低（P<0.05）。与B组相比，D组TG、Cr、BUN水平明显升高，GFR明显降低（P<0.05）。与C组相比，D组FINS、TG、FCP、Cr、BUN水平明显升高，GFR明显降低（P<0.05）。（2）A组与T2DM组两两组间血清betatrophin水平差异均有统计学意义（P<0.05）。与A组相比，T2DM组血清betatrophin水平明显升高。与B组相比，C组和D组血清betatrophin水平明显升高。与C组比较，D组血清betatrophin水平显著升高。I 山西医科大学（博）硕士学位论文（3）相关分析显示，A组血清betatrophin水平与UACR、Cr呈正相关，与SBP呈负相关。B组血清betatrophin水平与BMI、TC、TG、UACR呈正相关。C组血清betatrophin水平与TG、HsCRP呈正相关。D组血清betatrophin水平与TG、HsCRP、Cr、BUN呈正相关，与HbA1C、GFR呈负相关。在T2DM组，血清betatrophin水平与FCP、TC、TG、HsCRP、UACR、Cr、BUN呈正相关，与GFR呈负相关（P<0.05）。（4）在所有T2DM患者中，以血清betatrophin为因变量，将所有指标作为自变量，行多元逐步回归分析，结果显示Cr（B=2.923，P<0.001）、TG（B=59.670，P=0.004）、HbA1c（B=26.199，P=0.006）进入回归方程（R2=0.717，P<0.001）。（5）以尿白蛋白程度为因变量（正常蛋白=0，微量白蛋白=1，大量白蛋白=2），行有序多分类Logistic回归分析。结果显示，血清betatrophin是尿白蛋白的危险因素。结论：（1）T2DM肾病患者血清betatrophin水平显著升高，且随着糖尿病肾病加重血清betatrophin水平逐渐升高。（2）T2DM患者血清betatrophin水平与UACR呈正相关，提示随着血清betatrophin水平的升高，T2DM患者尿蛋白增加。（3）血清betatrophin是白蛋白尿的危险因素，betatrophin可能与DN的发生发展有关。关键词：Betatrophin，2型糖尿病，糖尿病肾病，尿白蛋白肌酐比II 山西医科大学（博）硕士学位论文Therelationshipbetweenserumbetatrophinleversanddiabeticnephropathyintype2diabeticpatientsanditssignificanceAbstractObjective:Thisstudymeasuredserumbetatrophinbetweennormalcontrol,normalalbuminuria,microalbuminuriaandmacroalbuminuria,andexploredthecorrelationsbetweenitsserumlevelsandDN,andprovideusefulinformationforearlydiagnosisofDN.Methods:Atotalof64subjectswereenrolledinthisstudy.TheparticipantsweredividedintoT2DMpatients(n=48)andnormalcontrolsubjects(n=16).TheT2DMgroupwasdividedintonormalalbuminuriagroup(16cases),microalbuminuriagroup(16cases)andmacroalbuminuriagroup(16cases)basedon(UACR)≥30mg/gand(UACR)≥300mg/g.Anthropometriccharacteristicsweremeasured.Glycosylatedhemoglobin(HbA1c),fastingplasmaglucose(FPG),fastinginsulin(FINS),lipids,high-sensitivityC-reactiveprotein(HsCRP),serumcreatinine(Cr),glomerularfiltrationrate(GFR)andotherbiochemicalparameterswerealsodetected.TheMAUofT2DMpatientsweredeterminedbyimmunoturbidimertry,andfastingserumbetatrophinconcentrationsweremeasuredbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA).Results:(1)Comparedwiththenormalcontrolgroup,waistline,SBD,FPG,FINS,TG,TC,LDL,CR,BUNandUACRinT2DMgroupweresignificantlyincreased(P<0.05),wIII 山西医科大学（博）硕士学位论文hileHDLandGFRweredecreased(P<0.05).Comparedwithnormalalbuminuriagroup,waistline,TG,Cr,andBUNinmacroalbuminuriagroupweresignificantlyincreased,whileGFRwasdecreased(P<0.05).Comparedwithmicroalbuminuriagroup,FINS,TG,FCP,CrandBUNinmacroalbuminuriagroupweresignificantlyincreased,whileGFRwasdecreased(P<0.05).(2)SerumbetatrophinlevelsinT2DMpatientsweresignificantlyhigherthaninnormalcontrolsubjects(P<0.05).Serumbetatrophinlevelsinabnormalalbuminuriapatientswerealsosignificantlyhigherthaninnormalalbuminuria(P<0.05).Serumbetatrophinlevelsinmacroalbuminuriapatientswerealsosignificantlyhigherthaninmicroalbuminuriapatients(P<0.05).(3)SerumbetatrophinlevelsinnormalcontrolpatientspositivelycorrelatedwithCrandUACR(P<0.05),butnegativelywithSBP(P<0.05).SerumbetatrophinlevelsinnormalalbuminuriapatientspositivelycorrelatedwithBMI,TC,TGandUACR(P<0.05).SerumbetatrophinlevelsinmicroalbuminuriapatientspositivelycorrelatedwithTGandHsCRP(P<0.05).SerumbetatrophinlevelsinmacroalbuminuriapatientspositivelycorrelatedwithTG,HsCRP,CrandBUN(P<0.05),butnegativelywithHbA1CandGFR(P<0.05).SerumbetatrophinlevelsinT2DMpatientspositivelycorrelatedwithFCP,TC,TG,HsCRP,UACR,CrandBUN(P<0.05),butnegativelywithGFR(P<0.05).(4)Multivariatestepwiseregressionmodelswerefitforbetatrophinasadependentvariable,otherindicatorsasindependentvariablestodemonstratetherelativecontributiontotheoutcomeones.TheresultsshowedthatCr（B=2.923，P<0.001）,TG（B=59.670，P=0.004）andHbA1c（B=26.199，P=0.006）wererelatedfactorsinfluencingserumbetatrophinlevel(R2=0.717，P<0.001).(5)OrdinalploytomouslogisticregressionanalysisshowedthatcirculatingbetatrophinwassignificantlyassociatedwithUACR.IV 山西医科大学（博）硕士学位论文Conclusion：(1)SerumbetatrophinlevelsweresignificantlyincreasedinT2DMwithDN.AstheDNgetsworse,serumbetatrophinlevelsgraduallyincrease.(2)SerumbetatrophinlevelswereassociatedwithUACRpositively.ThetrendinthepresenceofDNwasmoreapparentinhigherserumbetatrophintertilegroup.(3)Highlevelsofserumbetatrophinweretheriskfactorofproteinuria,whichmayplayanimportantroleinthepathogenesisofDN.Keywords:Betatrophin,type2diabetesmellitus,diabeticnephropathy,urinaryalbumincreatinineratio.V 山西医科大学（博）硕士学位论文前言糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）是糖尿病最主要的微血管并发症之一，是造成终末期肾病（end-stagerenaldisease,ESRD）的常见原因，而糖尿病患者中有20%-40%发生糖尿病肾病。糖尿病主要引起肾小球病变，表现为肾小球系膜增生、基底膜增厚和K-W（Kimmelstiel-Wilson）结节等，是病理诊断的主要依据[1],同时也可以引起肾小管间质病变、肾微血管病变[1]。DN起病隐匿，一旦进入临床期出现持续性蛋白尿,就不再可逆转,进入大量蛋白尿期后,进展至ESRD的速度约为其他肾脏疾病的14倍,平均7年即可导致终末期肾衰。但是动物实验证实,早期糖尿病肾病的肾脏形态和功能改变是可逆的。目前认为，糖尿病肾病的发生发展与高血压、糖脂代谢紊乱、蛋白代谢紊乱、机体慢性炎症状态等多种因素有关。大量研究证明，许多细胞因子在DN的发生发展中发挥作用，或许我们可以寻找新的细胞因子，为DN的早期诊断提供理论依据。Betatrophin因子是一种主要由肝脏分泌的活性多肽，又名ANGPTL8，因最初认为其能够高效而特异的促进胰岛b细胞增殖而广受关注[2,3]。Fu等[4]证实betatrophin水平在糖尿病患者体内是升高的。甚至有学者通过分析58例非糖尿病人群及73例新诊断T2DM患者后，推测betatrophin可以是诊断T2DM的强效指标，诊断T2DM的betatrophin浓度的最佳切点为501.23pg/mL[5]。但Abu-FarhaM等认为betatrophin与T2DM无关[6,7]，最后的结果可能是受了年龄因素的影响。T2DM患者体内胰岛素抵抗及高胰岛素血症是其突出特征。Chen等[8]对比糖耐量正常组、空腹血糖受损组、糖调节受损组、新诊断T2DM组人群发现betatrophin与胰岛素抵抗指数呈正相关。Yi等[9]在使用胰岛素受体拮抗剂S961诱导的胰岛素抵抗小鼠模型中，发现胰岛素抵抗刺激betatrophin基因上调，证实betatrophin与胰岛素抵抗密切相关。几项体外实验表明，胰岛素能够刺激betatrophin在人肝细胞及脂肪细胞的表达[10-12]。Lu等[13]发现在肝细胞中，胰岛素刺激betatrophin表达，并且呈剂量和时间依赖性。进一步研究表明，胰岛素上调betatrophin，而胰岛素抵抗下调betatrophin，且都是通过PI3K/Akt通路实现的[13]。甚至在胰岛素抵抗小鼠，用二甲双胍治疗后betatrophin水平升高。这与目前的研究结果二甲双胍能改善PI3K/Akt通路及胰岛素抵抗相符。但是Espes等[14]发现，服用可以改善胰岛素抵抗的二甲双胍后，T2DM患1 山西医科大学（博）硕士学位论文者血清betatrophin水平有所降低，支持betatrophin与胰岛素抵抗呈正相关的观点。Gusarova等[15]在高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠模型中，发现增多的betatrophin并没有改变b细胞的增殖或糖代谢，但是却增加了甘油三酯水平。Quagliarini等[16]报道在缺少Angptl3的野生小鼠中，Angptl8的过表达并未导致高甘油三酯血症，而两者同时存在时，甘油三酯水平增加10倍以上，随后证实，ANGPTL8促进ANGPTL3的裂解。ANGPTL3裂解后释放的功能性N端抑制脂蛋白酯酶，导致TG清除减少及高甘油三酯血症[17]。与此同时，多项研究表明betatrophin还与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、总胆固醇（TC）等脂代谢指标密切相关[18,19]。但其具体相关性尚无统一观点。糖尿病肾病的发生发展与多种代谢指标密切相关。国外有研究表明，糖尿病患者胰岛素敏感性下降与肾脏细胞葡萄糖代谢异常间存在相关性，表明胰岛素抵抗可能参与了DN的发生发展[10]。DN早期表现为微量白蛋白尿，Jauregui等[20]的研究也表明，肾足细胞胰岛素信号通路异常可能参与了微量白蛋白尿的发生。此外，脂代谢紊乱也参与了DN的发生发展。有研究证实，在T1DM患者中血脂与DN之间存在确切的相关性[21]。在T2DM，随着三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白等脂质堆积于肾，糖基化终末产物及多种免疫相关细胞因子分泌增多，诱发氧化应激反应最终导致肾小管内皮损伤、肾小球硬化以及肾小管间质损伤[22]。Chen等[23]研究发现，T2DM患者中，高水平的betatrophin与受损的肾功能及尿白蛋白排泄率有关。同时该研究也发现，与对照组相比，T2DM组血清betatrophin水平显著升高，且血清betatrophin水平与UACR呈正相关，与肾小球滤过率呈负相关[23]。综上，betatrophin可能参与了DN的发生发展。但是目前针对我国人群血清betatrophin水平与DN相关性的研究尚少。本研究比较了正常对照人群、T2DM组、微量蛋白尿组及大量蛋白尿组的血清betatrophin水平，分析了T2DM患者中血清betatrophin水平与尿白蛋白肌酐比（UACR）、血肌酐（Cr）及GFR等肾功能指标的相关性，探讨糖尿病肾病患者血清betatrophin水平的变化及意义。2 山西医科大学（博）硕士学位论文常用缩写词中英文对照表英文缩写英文名称中文名称FBGfastingblood-glucose空腹血糖HbA1cglycosylatedhemoglobin糖化血红蛋白TGtriglyceride甘油三酯TCtotalcholesterol总胆固醇LDL-Clow-densitylipoproteincholesterol低密度脂蛋白胆固醇HDL-Chigh-densitylipoproteincholesterol高密度脂蛋白胆固醇FINSfastinginsulin空腹胰岛素FCPfastingc-peptide空腹C肽，HsCRPhigh-sensitivityC-reactiveprotein高敏C反应蛋白BUNbloodureanitrogen血尿素氮Crserumcreatinine血肌酐BMIbodymassindex体质量指数UACRurinaryalbumincreatinineratio尿白蛋白肌酐比GFRglomerularfiltrationrate肾小球滤过率SBPSystolicpressure收缩压DBPdiastolicbloodpressure舒张压DNdiabeticnephropathy糖尿病肾病ELISAenzyme-linkedimmunosorbantassay酶联免疫吸附试验ESRDend-stagerenaldisease终末期肾病3 山西医科大学（博）硕士学位论文1研究对象与方法1.1研究对象收集2016年11月-2017年4月就诊于山西医科大学第二医院内分泌科的2型糖尿病病例48例（男性22例，女性26例），平均年龄（58.38±11.69）岁。另选健康体检人群16例作为正常对照组（normalcontrol,A组）（男性11例，女性5例），平均年龄（55.06±5.99）岁。2型糖尿病组按照ADA（2013）尿白蛋白排泄异常定义[24]，以即时尿尿白蛋白/肌酐比值ACR<30mg/g、30~300mg/g、≥300mg/g分别分为正常蛋白尿组（normalalbuminuria，B组）16例（男性9例，女性7例），平均年龄（55.31±14.8）岁、微量蛋白尿组（microalbuminuria，C组）16例（男性10例，女性6例），平均年龄（59.38±10.72）岁及大量蛋白尿组（macroalbuminuria，D组）16例（男性3例，女性13例），平均年龄（60.44±8.85）岁。1.1.1入选标准：T2DM组符合1999年WHO糖尿病诊断及分型标准，即糖尿病症状+任意时间血浆葡糖糖水平≥11.1mmol/L（200mg/dl），或空腹血浆葡糖糖（FPG）水平≥7.0mmol/L（126mg/dl）或口服糖耐量实验（OGTT）2小时血糖（2hPG）水平≥11.1mmol/L（200mg/dl）。1.1.2排除标准：1型糖尿病、妊娠期糖尿病、特殊类型糖尿病、有妊娠期糖尿病史、心脑血管疾病、恶性肿瘤、严重全身感染、自身免疫性疾病、慢性肝肺疾病；甲状腺功能异常者；妊娠、哺乳期妇女；近1月接受任何外科手术患者；精神疾病既往史及家族史；不愿合作者。所有研究对象还需排除发热、急性糖尿病并发症等情况。1.2研究方法1.2.1临床资料收集经培训后，按照统一标准测量所有受试者身高、体重、血压、腰围。身高测量：所有受试者脱去鞋袜、帽子等，站于平地上，保持身体呈立正姿势，两脚跟并拢，双眼平视前方，两手臂自然垂于身体两侧；体重测量：采用电子称重仪称量体重，清晨4 山西医科大学（博）硕士学位论文空腹静息状态下受试者脱去鞋袜，穿着单衣裤自然站立于体重计踏板的正中央，保持平稳；腰围测量：受试者脱去衣物，身体直立，腹部放松，平稳呼吸，用皮尺平脐绕腹一周；血压测量：嘱被测者至少静坐5分钟，测量前的半个小时以内禁止吸烟、饮用咖啡及剧烈运动，受试者呈坐姿，使用校准过的水银血压计测量血压。计算体重指数（bodymassindex，BMI）=体重/身高2（kg/m2）。1.2.2实验室检查指标检测所有受试者隔夜空腹8h以上，于次日清晨抽取肘静脉血，测定相关血生化指标。表1-1各检测实验室指标及测定方法实验室指标测定方法空腹血糖（fastingblood-glucose,FBG）己糖激酶法糖化血红蛋白（glycosylatedhemoglobin,HbA1c）高效液相色谱法甘油三酯（triglyceride,TG）酶法总胆固醇（totalcholesterol,TC）胆固醇氧化酶法低密度脂蛋白胆固醇（low-densitylipoproteincholesterol,LDL-C）直接法高密度脂蛋白胆固醇（high-densitylipoproteincholesterol,HDL-C）直接法空腹胰岛素(fastinginsulin,FINS)化学发光法空腹C肽(fastingc-peptide，FCP)化学发光法高敏C反应蛋白(high-sensitivityC-reactiveprotein,HsCRP)免疫比浊法血尿素氮（bloodureanitrogen,BUN）尿酶紫外速率法血肌酐(serumcreatinine,Cr)酶法尿微量白蛋白(microalbuminuria,MAU)比浊法尿肌酐（urinecreatinine,CREA）电极法计算尿白蛋白肌酐比（urinaryalbumincreatinineratio，UACR）=尿微量白蛋白/尿肌酐（mg/g）。Cockcroft-Gault计算法计算肾小球滤过率（glomerularfiltrationrate，GFR）=[(140-年龄)×体重(kg)]/[0.818×血肌酐(umol/L)]（ml·min-1）（女性计算结果×0.85）。1.2.3血标本收集及保存使用干燥的、一次性的紫色EDTA-K2抗凝真空采血管留取空腹血标本，于室温下静置2h，随后以3000rpm在低速离心机中离心3分钟，取上清液装于1.5mlEppendorf管中，置于-70℃冰箱冻存备检。5 山西医科大学（博）硕士学位论文1.2.4主要仪器设备及试剂表1-2主要仪器设备及试剂仪器及试剂名称生产厂家全自动生化仪日立公司，日本恒温箱上海博讯实业有限公司，中国低速离心机SC-3614安徽中科中佳科学仪器有限公司，中国低温冰箱海尔公司，中国全自动酶标仪芬兰Lab公司，芬兰人betatrophinELISA试剂盒武汉EIAab公司，中国1.2.5实验方法1.2.5.1血清betatrophin的ELISA检测原理采用双抗体ABC-ELISA法。抗人betatrophin单抗包被于酶标板，将标准品及样品加入酶标板微孔中，其中的betatrophin与包被于酶标板中的抗人betatrophin单抗结合，然后向微孔中加入生物素化的抗人betatrophin，洗板后，留免疫复合物连接在板上，加入辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）标记的亲和素与生物素结合，再加入底物工作液显色，最后加入终止液硫酸终止反应。样品中betatrophin浓度与颜色深浅呈正相关。在酶标仪450nm波长处测定样品的吸光度（opticaldensity，OD值），后通过绘制标准曲线求出样本中的betatrophin浓度。1.2.5.2样本准备将血清样本自-70℃冰箱中取出，至室温中缓慢融冻，逐渐平衡至室温（25℃）。1.2.6试剂准备1.所有试剂在使用前缓慢平衡至室温，多余试剂于4℃冰箱冷藏。2.10×标本稀释液用蒸馏水做1:10倍稀释，充分漩涡振荡使充分混匀备用。3.20×浓缩洗涤液用重蒸馏水做1:20倍稀释，充分漩涡振荡使充分混匀备用。4.betatrophin标准品样配置（见图1-1）：取8个1.5ml离心管，第1管加标本稀释液900ul，第2至第8管加标本稀释液500ul。在第一管中加入80ng/ml标准品溶液100ul置于漩涡振荡上震荡混匀，用加样器吸出500ul，移入第二管。如此反复做对倍稀释，从第7管中吸出500ul弃去，第8管为空白对照。6 山西医科大学（博）硕士学位论文图1-1betatrophin标准品稀释方法1.2.7检测程序1.加样：前2列为标准品孔，其余为样品孔。第一列8个微孔中分别加入配置好的不同浓度betatrophin标准品100ul，第二列为标准品副孔。样品孔中加入待测血清样本100ul。将反应板轻轻晃动混匀，使液体与孔底部的单克隆抗体充分接触，在酶标板上贴覆膜，置于37℃恒温箱40分钟。加样时使用一次性枪头贴近酶标板孔底部，加样时应快速准确（十分钟内加完所有孔），尽量不接触到孔壁，避免产生气泡。使用实验记录本详细记录酶标板中所加标准品和样品的具体位置。2.洗板：迅速将酶标板翻转180度倾倒并甩出液体，用配置好的洗涤液将反应板充分洗涤5次，反扣在滤纸上印干。3.每孔加入蒸馏水及第一抗体工作液各50ul（空白孔除外），给酶标板覆上新的覆膜，将反应板充分混匀后置于37℃恒温箱20分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul，将反应板充分混匀后置于37℃恒温箱10分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul混匀。置于37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀（终止液加入顺序与底物溶液相同），终止相应的反应，此时孔内蓝色立即转变为黄色。若孔内液体颜色未完全转化为黄色，可轻轻摇晃酶标板使底物溶液与终止液充分混合。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。7 山西医科大学（博）硕士学位论文1.2.8结果计算1.以标准品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0pg/ml为纵坐标，相应的OD值为横坐标，使用软件绘制标准曲线，选取拟合度最佳的曲线方程（见图1-2）。图1-2betatrophin标准曲线2.将样品孔的OD值带入方程，计算出样品的实际浓度值。1.2.9试剂盒性能灵敏度：最低betatrophin检测浓度为小于62pg/mL。特异性：可同时检测重组或天然的人betatrophin，不与人其他细胞因子有交叉反应。重复性：板内、板间变异系数均小于10%。1.3统计学方法采用SPSS20.0统计软件进行统计分析，符合正态分布的计量资料采用均数±标准差（x±s）表达，非正态分布的计量资料以四分位数间距[M(QL，QU)]表示。正态分布资料多组间比较采用单因素方差分析，多组间进一步两两比较采用LSD-t检验。非正态分布资料的组间比较采用非参数检验。血清Betatrophin水平与各指标间的相关性分析采用Spearman相关分析。多元逐步回归分析血清Betatrophin水平的主要影响因素。以尿蛋白的程度为因变量，采用有序多分类Logistic回归分析，探讨血清Betatrophin水平与尿蛋白的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。8 山西医科大学（博）硕士学位论文2结果2.1各组间一般临床资料及各生化指标的比较（见表2-1，表2-2）A、B、C、D四组间年龄、BMI、DBP、TC、HsCRP水平差异无统计学意义（P>0.05）。与A组比较，T2DM组腰围、SBD、FPG、FINS、HbA1C、TG、TC、LDL、CR、BUN、UACR水平均明显升高，HDL、GFR水平明显降低（P<0.05）。与A组比较，D组腰围、TG、Cr、BUN水平均明显升高，GFR水平明显降低（P<0.05）。与B组相比，D组TG、Cr、BUN水平明显升高，GFR水平明显降低。与C组相比，D组FINS、TG、FCP、Cr、BUN水平明显升高，GFR水平明显降低（P<0.05）。2.2各组间血清betatrophin水平的比较（见表2-3，图2-1）A组与B、C、D各组间血清betatrophin水平差异均有统计学意义（P<0.05）。与A组相比，T2DM组血清betatrophin水平明显升高。与B组相比，C组及D组血清betatrophin水平明显升高，且D组血清betatrophin水平较C组也明显升高。2.3血清betatrophin与各指标的spearman相关分析（见表2-4）在A组血清betatrophin与UACR、Cr呈正相关，与SBP呈负相关。在B组，血清betatrophin与BMI、TC、TG、UACR呈正相关。在C组，血清betatrophin与TG、HsCRP呈正相关。在D组，血清betatrophin与TG、HsCRP、Cr、BUN呈正相关，与HbA1C、GFR呈负相关。在T2DM组，血清betatrophin与FCP、TC、TG、HsCRP、UACR、Cr、BUN呈正相关，与GFR呈负相关。2.4多元逐步回归分析血清betatrophin的影响因素（见表2-5）在所有T2DM患者中，进一步以血清betatrophin为因变量，将所有指标作为自变量，行多元逐步回归分析，结果显示Cr、TG、HbA1c是血清betatrophin水平的主要影响因素（P<0.01）。2.5Betatrophin与各指标的有序多分类Logistic回归分析（见表2-6）为进一步探讨血清betatrophin水平与白蛋白尿发生的相关性，以尿白蛋白程度9 山西医科大学（博）硕士学位论文为因变量（正常蛋白=0，微量白蛋白=1，大量白蛋白=2），行有序多分类Logistic回归分析。结果显示，血清betatrophin是尿白蛋白的危险因素（P<0.5）。10 山西医科大学（博）硕士学位论文2.6结果附表表2-1A组与T2DM组一般资料和生化指标比较[x±s，M（P25，P75）]测量指标A组T2DM组F/X2P例数（男/女）16(11/5)48（22/26）2.0880.149年龄（岁）55.06±5.9958.38±11.694.3980.148腰围（cm）89±7.3392.51±5.10a3.8520.037BMI（kg/m2）25.43±2.3324.88±2.290.3600.407SBP（mmHg）122.31±10.57136.46±14.76a1.0680.001DBP（mmHg）77.88±5.5880.52±11.055.7170.218FPG(mmol/L)5.34±0.59.33±3.98a18.272<0.001FINS(μIU/mL)8.3±2.6412.04±2.33a0.128<0.001FCP(ng/ml)1.01±0.151.02±0.150.0710.706HbA1c(%)5.48±0.298.86±2.29a22.073<0.001TC(mmol/L)4.06±0.554.72±1.52a7.4270.013TG(mmol/L)1.58±0.442.37±1.30a10.062<0.001HDL(mmol/L)1.4±0.311.06±0.25a8.1670.001LDL(mmol/L)1.87±0.72.46±0.86a0.1790.014HsCRP(mg/L)1.18(1.07,1.42)1.11（0.65，4.17）------0.762UACR(mg/g)16.44±5.12209.18±233.61a34.657<0.001Cr(μmol/L)58.88±8.3789.19±61.10a10.4500.002BUN(mmol/L)5.2±1.177.53±5.02a10.7100.004GFR(ml/min)118.27±11.9395.66±41.40a13.856<0.001注：数据以均数±标准差(x±s)以及中位数（四分位数间距）表示；A组：正常对照组；BMI：体重指数；SBP：收缩压；DBP：舒张压；TC：总胆固醇；FPG：空腹血糖；FINS：空腹胰岛素；FCP：空腹C肽；HbA1c：糖化血红蛋白；TC：总胆固醇；TG：甘油三酯；HDL：高密度脂蛋白胆固醇；LDL：低密度脂蛋白胆固醇；HsCRP:高敏C反应蛋白；UACR：尿白蛋白肌酐比；Cr：血肌酐；BUN：血尿素氮；GFR：肾小球滤过率。a：与A组比较，P<0.05。11 山西医科大学（博）硕士学位论文表2-2各组一般资料和生化指标比较[x±s，M（P25，P75）]测量指标A组B组C组D组F/X2P例数（男/女）16(11/5)16(9/7)16(10/6)16(3/13)9.6970.021年龄（岁）55.06±5.9955.31±14.859.38±10.7260.44±8.851.0880.361a腰围（cm）89±7.3390..81±3.8192.93±6.8293.8±3.922.2940.87BMI（kg/m2）25.43±2.3324.86±1.7924.98±3.3324.80±1.450.240.868aSBP（mmHg）122.31±10.57132.13±137.5±17.95139.75±5.0660.003aa12.7412.85DBP（mmHg）77.88±5.5883.44±6.879.94±15.3378.19±9.31.0450.379aaaFPG(mmol/L)5.34±0.59.12±3.319.68±3.659.2±5.035.190.003aaa,cFINS(μ8.3±2.6412.03±2.1311.21±2.1112.89±2.55113.31<0.001IU/mL)cFCP(ng/ml)1.01±0.151.03±0.130.95±0.131.9±0.172.660.056aaaHbA1c(%)5.48±0.298.73±2.139.54±1.968.33±2.6912.691<0.001TC(mmol/L)4.06±0.554.61±1.224.53±1.085.01±2.11.3240.275TG(mmol/L)1.58±0.441.85±0.832.03±0.83.23±1.667.884<0.001a,b,caaaHDL(mmol/L)1.4±0.311.11±0.251.12±0.280.96±0.188.167<0.001aaLDL(mmol/L)1.87±0.72.49±0.642.46±0.792.44±1.132.0580.115HsCRP(mg/L)1.18(1.07,1.42)1.27(0.68,2.83)0.69(0.47,6.37)2.47(0.8,14.54)------0.258UACR(mg/g)16.44±5.1213.6±6.96123.02±490.92±86.674<0.001a,ba,b,c80.22176.43Cr(μmol/L)58.88±8.3759.44±10.0165.19±14.5142.94±15.083<0.001a,b,c82.14BUN(mmol/L)5.2±1.174.98±1.175.37±1.2312.25±17.977<0.001a,b,c6.35GFR(Ml/min)118.27±11.93118.05±31.49102.58±31.266.34±9.541<0.001a,b,c43.6注：B组：正常蛋白尿组；C组：微量蛋白尿组；D组：大量蛋白尿组；略语同表2-1。a：与A组比较，P<0.05；b：与B组比较，P<0.05；c：与C组比较，P<0.05。12 山西医科大学（博）硕士学位论文表2-3A组、B组、C组、D组间血清betatrophin水平比较T2DM组A组B组C组D组Betatrophin491.4±633.04±181778.96±171.73a,945.53±300.55a,785.844±255.71(ng/mL)73.53.37abb,ca注：略语同表2-1。a：与A组比较，P<0.05；b：与B组比较，P<0.05；c：与C组比较，P<0.05。图2-1各组间血清betatrophin水平比较注：略语同表2-1。a：与A组比较，P<0.05；b：与B组比较，P<0.05；c：与C组比较，P<0.05。13 山西医科大学（博）硕士学位论文表2-4betatrophin与临床各指标的相关性分析（rs）血清betatrophin水平临床指标A组B组C组D组T2DM组rsPrsPrsPrsPrsP年龄（岁）0.3870.1390.2920.273-0.1250.644-0.0190.9460.2170.138腰围（cm）-0.1610.5520.4860.0570.1340.621-0.4710.0660.1620.271BMI（kg/m2）-0.4130.1120.7250.0010.2560.339-0.3570.1750.1660.261SBP（mmHg）-0.5360.0320.2760.300-0.3020.2550.2970.2640.2420.098DBP（mmHg）0.2490.3520.4580.074-0.3190.2290.1380.609-0.0310.836FPG(mmol/L)0.1480.5850.2970.263-0.0030.991-0.4320.095-0.1490.313FINS(μIU/mL)0.0160.9530.3830.144-0.0880.7440.2460.3590.2110.150FCP(ng/ml)0.3140.2360.4430.086-0.0740.7850.4630.0710.3060.035HbA1c(%)0.3480.1860.1600.5530.3450.191-0.5520.027-0.0370.803TC(mmol/L)0.1220.6520.5040.0470.1030.7040.2220.4090.3380.019TG(mmol/L)0.4400.0880.781<0.0010.6030.0130.6200.010.672<0.001HDL(mmol/L)-0.3290.214-0.0010.996-0.1600.553-0.2540.342-0.2420.098LDL(mmol/L)0.2560.3380.4830.0580.0520.850-0.0050.9850.1450.327HsCRP(mg/L)-0.2060.443-0.1810.5020.5820.0180.5110.0430.3910.006UACR(mg/g)0.6270.0090.7680.001-0.1760.513-0.1530.570.496<0.001Cr(μmol/L)-0.6040.0130.3300.2120.1490.5820.959<0.0010.647<0.001BUN(mmol/L)0.0940.730-0.2830.2870.0880.7450.873<0.0010.4480.001GFR(Ml/min)-0.4240.102-0.1180.6640.3290.213-0.813<0.001-0.4770.001注：略语同表2-1。14 山西医科大学（博）硕士学位论文表2-5多元逐步回归分析血清betatrophin水平的主要影响因素变量ΒSEB’tP95%CI常数124.925108.8861.1470.257（-94.521，344.370）Cr2.9230.4600.6986.356<0.001（1.996,3.849）TG59.67019.7800.3033.0170.004（19.807，99.534）HbA1C29.19910.0040.2622.9190.006（9.037，49.360）注：略语同表2-1；B：非标准化系数；SE：非标准化系数的标准误；B’：标准化系数；CI：可信区间。表2-6发生白蛋白尿的相关因素变量BSEWald值P值OR值95%CI常数项2.5383.9570.4110.52112.652——常数项4.4014.0021.2090.27181.555——Betatrophin0.0030.0024.0160.0451.0031.000-1.007SBP0.0160.0220.5180.4721.0160.974-1.059HbA1c0.0090.1460.0040.9521.0090.758-1.342TG0.4580.3541.6710.1961.5810.790-3.165年龄0.0160.0290.3080.5791.0160.960-1.075BMI-0.1380.1420.9530.3290.8710.660-1.149注：略语同表2-1；B：偏回归系数；SE：偏回归系数的标准误；OR：优势比；CI：可信区间。15 山西医科大学（博）硕士学位论文3讨论近年来，随着我国经济的高速发展、生活方式西方化及人口老龄化等改变，我国已成为全球糖尿病人数最多的国家，糖尿病也已成为继心血管疾病、肿瘤之后严重危害人类健康的重要慢性非传染性疾病。糖尿病患者体内的糖脂代谢紊乱、蛋白质代谢紊乱等病理状态可造成多系统损害，导致多器官慢性进行性衰退，造成严重的家庭及社会负担。因此对糖尿病并发症的早期诊断及早期干预显得尤为重要。糖尿病肾病（DiabeticNephropathy,DN）是糖尿病最主要的微血管并发症之一，起病隐匿，一旦进入大量蛋白尿期，进展至终末期肾病的速度约为其他肾脏病变的14倍。并且有学者认为，DN本身可以作为独立危险因素影响糖尿病其他并发症的发生。因此对于DN的关注显得尤为重要。近年来的研究表明，肝细胞及脂肪细胞分泌的betatrophin因子（又名血管紧张素样蛋白ANGPTL8）与糖脂代谢密切相关，且与DN的发生发展可能存在相关性，有望成为DN早期预防及诊断的有效生物学指标。本研究结果表明，与正常对照组相比，T2DM组的血清betatrophin水平显著升高。相关性分析显示，T2DM患者的血清betatrophin水平与UACR呈正相关，与GFR呈负相关。此外，有序多分类logistic回归分析的结果也显示，随着血清betatrophin水平的不断升高，尿蛋白的量明显增加。UACR与GFR是判断肾小球损害的重要指标。以上结果表明，血清betatrophin水平与DN密切相关。蛋白尿是DN主要临床表现，也是DN进展的独立危险因素[25]。足细胞受损是蛋白尿及肾小球硬化的直接原因[26]。而足细胞是肾脏唯一的胰岛素敏感细胞，因此胰岛素分泌异常及功能障碍会导致蛋白尿的发生[27]，且蛋白尿的出现早于肾脏病理结构改变。T2DM患者体内往往存在严重的胰岛素抵抗及高胰岛素血症。胰岛素抵抗情况下，磷脂酰肌糖-3/蛋白激酶B旁路受损,胰岛素激活内皮氮氧化合酶和氮氧化物,抑制肌浆球蛋白活性从而产生血管舒张作用的功能被阻断，导致血管收缩和高血压[28]。同时高胰岛素血症增强肾小球毛细血管的渗透性，刺激系膜细胞分泌基膜糖蛋白，导致肾小球肥大，系膜区基质增多[29]。由此可见，胰岛素抵抗及高胰岛素血症可能参与了DN的发生发展。Hu等[30]对83例新诊断T2DM患者及年龄、性别、BMI相匹配的83例健康对照组研究中发现，新诊断T2DM患者体内血清betatrophin水平与胰岛素抵抗指数呈正相关。Erol等对45例妊娠期糖尿病孕妇及45例非妊娠期糖尿病孕妇的研究16 山西医科大学（博）硕士学位论文中，发现空腹胰岛素水平和胰岛素抵抗指数是血清betatrophin水平的独立危险因素[31]。C肽与胰岛素有共同的前体胰岛素原，具有很强的种属特性，可用来较准确评价胰岛B细胞功能。尿白蛋白排泄率增加除与肾小球滤过膜受损有关外，与肾小管间质纤维化也密切相关[32]。柯剑婷等[33]的动物实验表明，C肽通过激活蛋白激酶A途径减轻肾小管间质的氧化应激反应，抑制TGF⁃β1的表达，改善肾小管间质纤维化，减少尿蛋白。同时有研究表明，C肽还可通过抑制氧化应激，减少高糖诱导的细胞凋亡[34],产生一定的肾脏保护作用。Trebotic等[35]发现，怀孕妇女中，无论有无糖尿病，betatrophin均与C肽呈负相关。但也有研究认为，betatrophin在正常人体内与C肽呈正相关，而在糖尿病患者体内，增加的betatrophin与C肽并无相关性[6]。Espes等[14]的一项小型研究认为，在正常人及糖尿病患者中，betatrophin均与C肽无关。本研究相关性分析表明，在T2DM患者中，betatrophin与空腹C肽水平呈正相关。这与上述研究结果不太一致，可能与研究人种差异，样本量过少等因素有关。现有的研究已表明，胰岛素抵抗、高胰岛素血症与高血压之间密切相关。多数学者认为高胰岛素血症使肾脏水钠重吸收增强,交感神经兴奋,动脉弹性减退,血压升高[36]。这与本研究中较正常组空腹胰岛素水平升高的T2DM组，其收缩压也较正常组高相符。赵从军等[37]对252例T2DM患者进行回顾性分析，结果显示糖尿病合并高血压组,其DN发生率较血压正常组明显升高,高血压是DN的独立危险因素。高血压使肾小球入球小动脉压力升高，肾小球高灌注、高滤过，同时肾脏细小动脉硬化，最终导致肾脏损伤及肾功能障碍[8]。Chen[23]等对109例T2DM及32例健康对照人群研究数据表明，T2DM患者合并有高血压时血清betatrophin水平显著升高,血清betatrophin水平与收缩压呈正相关。有趣的是Fu等[38]在对559名年轻受试者研究后认为，只有在维生素D缺乏时，血清betatrophin水平方与包括高血压，血脂异常和高血糖在内的不良代谢特征呈正相关，而在维生素D水平较高的受试者中betatrophin仅与空腹胰岛素、餐后2h胰岛素和胰岛素抵抗呈负相关，维生素D能够改变年轻的代谢综合征患者betatrophin水平与心血管疾病危险因素的相关性。本研究显示，T2DM患者体内betatrophin水平与血压之间并无相关性。但在健康人群中，betatrophin水平与收缩压呈负相关。这与上述研究结果相矛盾，造成这种不同可能与研究对象不同及研究样本量过小有关。胰岛素抵抗状态下，糖脂代谢紊乱。随着糖尿病肾病病情的加重，脂代谢紊乱加17 山西医科大学（博）硕士学位论文重，提示脂代谢紊乱参与糖尿病肾病的发生发展。Islam等[39]对中国、印度、马来西亚不同人种的微量蛋白尿相关因素研究中发现微量蛋白尿与高甘油三脂和低高密度脂蛋白密切相关。有研究进一步发现，DN早期甘油三脂、低密度脂蛋白升高为主，随着DN的进展，甘油三酯、低密度脂蛋白升高更加明显基础上，总胆固醇升高和高密度脂蛋白下降[40]。脂代谢异常参与DN进展的机制包括氧化应激反应、血流动力学异常、单核-巨噬细胞吞噬功能增强、凝血异常等多个方面。随着DN病程的不同，甘油三酯及胆固醇对DN有着不同的影响。Fenzl等[19]对年龄、性别相匹配的瘦体型（n=20）和病态肥胖患者（n=19）及年龄、性别和BMI匹配的非糖尿病患者及（n=19）T2DM患者（n=18）研究发现betatrophin参与脂质代谢，在肥胖患者体内，血清betatrophin水平明显增高且与胆固醇水平呈正相关。Chen等[23]多元回归分析认为，betatrophin是DN正性、独立预测指标。Betatrophin与甘油三酯呈正相关，与eGFR、胆固醇、HDL呈负相关。谢心苗[18]通过检测初诊T2DM，糖尿病前期、糖耐量正常人的血清betatrophin水平，发现新诊断T2DM体内betatrophin水平与TG呈正相关，与胆固醇、胰岛素抵抗指数呈负相关。这与Chen等[23]的研究结果相一致。目前betatrophin对TG的影响机制相对较明确。动物实验发现，敲除betatrophin基因的小鼠其体内TG水平下降了70%[41]。Quagliarini等[16]在敲除了ANGPTL3基因而过表达ANGPTL8的老鼠中，并未发现高甘油三酯血症，从而进一步证实ANGPTL8通过促进ANGPTL3的裂解来影响TG水平。ANGPTL3裂解后释放的功能性N端抑制脂蛋白酯酶活性，导致TG清除减少及TG升高[17]。本研究结果显示，在T2DM患者中，betatrophin与TG、TC呈正相关，多元逐步回归显示，TG是betatrophin的主要影响因素。血清betatrophin与TC的相关性尚存争议，需要更多的研究去论证。胰岛素抵抗与肥胖、炎症之间密切相关。肥胖本身可独立于糖尿病引起肾损伤，产生肥胖性肾病。肥胖是一种慢性低度炎症状态，其与DN的发生与炎症反应及多种促炎因子密切相关。脂肪组织的增多可以导致血管、结缔组织增生和巨噬细胞浸润。脂肪细胞和巨噬细胞分泌大量的细胞因子,导致全身性胰岛素抵抗、炎症状态和凝血前状态。脂肪组织通过增加炎症反应、增加游离脂肪酸释放、减少脂联素产生，在胰岛素抵抗中发挥重要作用[42,43]。脂联素具有肾脏保护功能，在肥胖、T2DM等疾病状态下，脂联素水平下降[44]，肾脏保护机制减弱，促进DN发生发展。促炎因子如肿瘤坏死因子，主要由单核细胞及巨噬细胞分泌，是一种多功能促炎因子，在脂质聚积、18 山西医科大学（博）硕士学位论文脂质代谢、胰岛素抵抗及内皮细胞生物学中均发挥作用，与DN的炎症反应和胰岛素抵抗密切相关[45]。但是在现有的报道中，betatrophin与肥胖之间的关系存在较多争论。Abu-Farha等[46]纳入82名非肥胖者及62名成年肥胖者探讨运动对血清betatrophin的影响时发现，肥胖人群betatrophin水平升高。但Gomez－Ambrosi等[47]研究显示循环血中betatrophin水平在肥胖人群中是降低。这与其他研究结果相一致[48,49]。有趣的是，在一项横断面研究[50]（n=100）中，循环血中betatrophin水平与皮下脂肪组织中的betatrophin水平相反。与消瘦组相比，病态肥胖组的血清betatrophin水平显著下降，特别是在肥胖的糖尿病病人中，betatrophin水平更低。但相反的是，病态肥胖病人皮下脂肪组织中的betatrophin水平是升高的，特别是在肥胖的糖尿病病人中。而内脏脂肪组织中betatrophin水平却是不变的。除肥胖本身外，肥胖、T2DM患者体内的低度慢性炎症状态也参与DN的进展。很多研究表明，作为低度炎症标志物的HsCRP在代谢综合征病人体内是增高的,HsCRP的增加与心血管疾病及T2DM的发生风险相关。甚至有学者认为，betatrophin可以成为预测慢性肾脏及T2DM的有力指标[51]。Abu-FarhaM等[52]一项纳入了1735例研究对象的研究中（代谢综合征组n=1011，非代谢综合征组n=724）发现，在代谢综合征患者体内，血清betatrophin与HsCRP呈正相关，患者体内的炎症状态可能与betatrophin的增加有关。这与本研究中，T2DM组betatrophin水平与HsCRP呈正相关相一致。这也提示减肥、控制体内炎症状态或许能够有效缓解DN进展。另一个影响DN进展的不可忽视的因素是高血糖。慢性高血糖除自身的高糖肾毒性外，尚可引起上述各种代谢紊乱，引发微血管和大血管病变。内皮细胞自身无法通过自动减少葡萄糖摄入避免高血糖的破坏[53]。高糖环境下，抗氧化酶糖基化增强，机体抗氧化能力减弱，与此同时，机体氧化应激增强，产生过多的氧自由基，氧化与抗氧化反应失衡，肾小球受损，蛋白滤出增加[54]。除抗氧化酶糖基化增加外，体内非酶促糖基化反应也增加，产生大量糖基化终末产物。目前在人体和动物糖尿病肾病模型肾脏中，均发现有糖基化终末产物的沉积。过多的糖基化终末产物直接影响胶原分子间及基底膜与细胞间的结合，使得滤过屏障受损，同时激活多种信号通路，参与DN的进展。高糖环境本身也可激活多种信号通路，比如随着内皮细胞葡萄糖摄入增加，多元醇通路激活，代谢物山梨醇大量蓄积，导致细胞内高渗状态，同时D-葡萄糖与肌醇载体竞争性结合,细胞内肌醇池耗竭,导致细胞膜Na+-K+-ATP酶活性降低,直接损19 山西医科大学（博）硕士学位论文伤肾小球、肾小管功能[55]。除血糖外，另一个反应糖代谢的指标是糖化血红蛋白（HbA1c）。糖尿病患者随着HbA1c的增加，氧合血红蛋白相对减少，内皮细胞缺氧，滤过膜受损加重。滤过屏障受损，蛋白滤出增加，刺激肾小球基底膜增厚及系膜增宽，加重肾小球硬化。可见，高血糖可通过多方面机制参与DN的进展。但目前对于血糖与betatrophin的关系尚存争议。RongGuo等[10]在HepG2细胞中发现，betatrophin通过加强胰岛素对糖异生关键酶的抑制作用，使得血清高水平betatrophin的小鼠体内有较低的血糖水平。Betatrophin甚至在可以在基因水平调控糖代谢。汪兰等[56]通过对转染有betatrophin信使RNA的HepG2细胞进行实时定量PCR和Westernblotting发现，betatrophin使得葡萄糖转运子2的基因表达上调，降低血糖。但也有研究认为，betatrophin与糖代谢之间并无相关性[15,47,51]。这些研究结果的不同，可能与研究对象、研究试剂等不同有关。在本研究中，在T2DM患者中行多元逐步回归显示，HbA1c是血清betatrophin的主要影响因素，支持betatrophin与糖代谢相关的观点。但betatrophin参与糖代谢的具体机制，尚需更深入的研究进行论证。DN的发生发展是多种因素共同作用的结果。由上可知，betatrophin与参与DN进展的多种因素均存在相关性，可以推测，betatrophin可能通过多种机制间接参与DN的发生发展。国内外已有研究明确支持betatrophin与DN发生发展的相关性。Ebert等[58]一项62位T2DM患者及58位非糖尿病患者的研究中，两组中约一半的受试者已经开始血液透析治疗或者eGFR高于50mL/min/1.73m2，研究结果表明，与eGFR大于50mL/min/1.73m2的T2DM者相比，行血液透析的DN患者血清betatrophin因子水平显著降低，betatrophin与eGFR呈正相关。但在其研究中，并未明确betatrophin与尿蛋白的相关性。Chen等[23]将109例T2DM患者依据尿白蛋白排泄率分为正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组以及大量白蛋白尿组后发现，T2DM患者中，血清betatrophin水平与UACR及肾功能相关，且与UACR呈正相关，与GFR呈负相关。杨敏等[59]的研究结果也与之相符。本研究Spearman相关分析结果显示，在T2DM患者中，血清betatrophin水平与UACR、Cr、BUN呈正相关，与GFR呈负相关。多元逐步回归显示，血Cr是betatrophin的主要影响因素。Logistic回归分析结果显示，血清betatrophin是尿白蛋白的危险因素。造成上述结果不同原因可能与Ebert等研究对象中纳入了血液透析的患者有关，目前血液透析对血清betatrophin的影响尚不清楚。推测betatrophin并不完全由肾脏排出。Chen等[23]的研究显示，T2DM组尿液中20 山西医科大学（博）硕士学位论文betatrophin的水平虽然较健康组是升高的，但是在不同蛋白尿各组间并无差异。也有学者认为，随机尿尿蛋白浓度与betatrophin之间并无相关性。综上所述，血清betatrophin作为新的肝细胞-脂肪因子，与参与糖肾进展的糖脂代谢紊乱、胰岛素抵抗、炎症状态等多种途径密切相关，其本身也是T2DM患者白蛋白尿的危险因素，其在DN的进展中可能发挥着重要的媒介作用。但本研究为小样本、单中心横断面研究，期待更多的研究为betatrophin与DN之间的相关性及相关机制进行进一步的探讨。21 山西医科大学（博）硕士学位论文4结论1.T2DM肾病患者血清betatrophin水平显著升高，且随着糖尿病肾病加重血清Betatrophin水平逐渐升高。2.T2DM患者中，血清betatrophin水平与FCP、TC、TG、HsCRP、UACR、Cr、BUN呈正相关，与GFR呈负相关。提示betatrophin可能与糖脂代谢紊乱，临床肾功能、机体慢性低度炎症状态有关。3.血清betatrophin是T2DM患者蛋白尿的危险因素，提示血清betatrophin水平的升高可能是DN发生发展的原因之一。22 山西医科大学（博）硕士学位论文参考文献[1]TervaertTW,MooyaartAL,AmannK,CohenAH,CookHT,DrachenbergCB,FerrarioFFogoAB,HaasM,deHeerE,JohK,NoelLH,RadhakrishnanJ,SeshanSV,BajemaIMBruijnJA.Pathologicclassificationofdiabeticnephropathy[J].JAmAocNephrol,2010,21:556-563.[2]谢心苗,高婷,杨梅丽,陈培红,金华,杨莉丽,于雪梅.糖耐量正常人群而非2型糖尿病患者血清Betatrophin水平与Irisin相关［J］上海医学,2014，37(11):931934．[3]MattijssenF,KerstenS.RugulationoftriglyceridemetabolismbyAngiopoietinlikeproteins［J］.BiochimBiophysActa,2012,1821(5):782789．[4]FuZ,BerhaneF,FiteA,SeyoumB,Abou-SamraAB,ZhangR.Elevatedcirculatinglipasin/Betatrophininhumantype2diabetesandobesity[J].SciRep,2014,4:5013.[5]MinYi,Rong-pingChen,RuiYang,Xian-fengGuo,Jia-chunZhang,HongChen.BetatrophinActsasaDiagnosticBiomarkerinType2DiabetesMellitusandIsNegativelyAssociatedwithHDL-Cholesterol[J].IntJEndocrinol.2015;2015:479157.[6]Abu‑FarhaM,AbubakerJ,Al‑KhairiI,CherianP,NoronhaF,HuFB,BehbehaniK,ElkumN.Higherplasmabetatrophin/ANGPTL8levelinType2diabetessubjectsdoesnotcorrelatewithbloodglucoseorinsulinresistance.SciRep.2015;5:10949.[7]Abu‑FarhaM,AbubakerJ,NoronhaF,Al‑KhairiI,CherianP,AlaroujM,BehbehaniK,ElkumN.Lackofassociationsbetweenbetatrophin/ANGPTL8levelandC‑peptideintype2diabeticsubjects.CardiovascDiabetol.2015;14:112.[8]ChenX,LuP,HeW,ZhangJ,LiuL,YangY,LiuZ,XieJ,ShaoS,DuT,SuX,ZhouX,HuS,YuanG,ZhangM,ZhangH,LiuL,WangD,YuXCirculatingbetatrophinlevelsareincreasedinpatientswithtype2diabetesandassociatedwithinsulinresistance.JClinEndocrinolMetab.2015;100:E96-E100.[9]YiP,ParkJS,MeltonDA.Betatrophin:ahormonethatcontrolspaAreaticβcellproliferation.Cell.2013;153:747-758.[10]RongGuoX,LiWangX,ChenY,HongYuanY,MeiChenY,DingY,FangJ,JiaoBianL,ShengLiD.ANGPTL8/betatrophinalleviatesinsulinresistanceviatheAkt-GSK3βorAkt-FoxO1pathwayinHepG2cells[J].Experimentalcellresearch，2016，345（2）：158-167.[11]NidhinaHaridasPA,SoronenJ,SädevirtaS,MysoreR,QuagliariniF,PasternackA,MetsoJ,PerttiläJ,LeivonenM,SmasCM,Fischer-PosovszkyP,WabitschM,EhnholmC,RitvosO,JauhiainenM,OlkkonenVM,Yki-JärvinenH.RegulationofAngiopoietin-LikeProteins(ANGPTLs)3and8byInsulin.TheJournalofclinicalendocrinologyandmetabolism100,E1299–1307,doi:10.1210/jc.2015-1254(2015).[12]Ren,G.,Kim,J.Y.&Smas,C.M.IdentificationofRIFL,anoveladipocyte-enrichedinsulintargetgenewitharoleinlipidmetabolism.Americanjournalofphysiology.Endocrinologyand23 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山西医科大学（博）硕士学位论文综述Betatrophin与糖尿病肾病的研究进展摘要：Betatrophin是一种主要由肝脏细胞分泌的活性多肽，在机体多种病理生理过程中发挥调节作用。近年来，多项研究显示betatrophin与代谢综合征相关代谢指标间密切相关，且与糖尿病肾病的发生发展可能存在相关性，未来有望为糖尿病肾病的诊断及治疗提供新的方向。关键词：betatrophin糖尿病肾病1.Betatrophin概述Betatrophin是非典型的血管紧张素样蛋白，在人体中，betatrophin几乎只在肝脏中表达，在脂肪、脑、直肠和心脏微量表达[1,2]，在小鼠中，betatrophin则主要表达在肝脏、棕色脂肪、皮下脂肪、性腺周围脂肪垫等组织中[3,4]。人类与小鼠该序列有高度同源性，该序列具有高度保守性[5]。1.1Betatrophin与胰岛细胞增殖2013年，Yi等[4]在注射胰岛素受体拮抗剂（S961）致胰岛素抵抗的小鼠模型中发现betatrophin水平增加，同时研究结果提示betatrophin能够高效、显著促进胰岛β细胞增殖。这使得betatrophin有望成为糖尿病治疗的新曙光而广受关注。随后Jiao等[5]使用同样的胰岛素受体拮抗剂得出了相同的结论。但是Gusarova等[6]使用和Yi等[4]研究中同样的实验方法再次研究betatrophin对小鼠胰岛β细胞的作用时，发现betatrophin高表达并未引起胰岛β细胞增殖。Cox等[7]用尾静脉注射betatrophin基因来制造高表达betatrophin的实验小鼠，结果也表明高表达betatrophin不能促进胰岛β细胞的增殖。针对这种不同的实验结果，Yi等[4]通过高压尾静脉注射的方法将betatrophin表达载体注射到小鼠体内，发现将betatrophin注入到8周龄的小鼠体内后，胰岛β细胞的复制显著增加。Yi等[8]重新实验注射胰岛素受体拮抗剂（S961）致胰岛素抵抗的小鼠模型，增加小鼠的数量，结果表明，betatrophin确实不能导致胰岛β细胞增殖。因此betatrophin可促进胰岛β细胞增殖尚存在争议。28 山西医科大学（博）硕士学位论文1.2Betatrophin与脂代谢随着对betatrophin研究的深入，其对相关代谢参数的影响越来越受关注。目前研究比较明确的是betatrophin与甘油三酯（TG）的关系。动物实验发现，betatrophin基因敲除后的小鼠其三酰甘油水平下降了70%[9]。同时，Zhang等[10]发现通过在肝脏过表达betatrophin可引起血浆TG水平的增高。Quagliarin等[2]发现只有当betatrophin与ANGPTL3同时存在的情况下，TG才会升高，从而推测ANGPTL8促进ANGPTL3的裂解。ANGPTL3裂解后释放的功能性N端抑制脂蛋白酯酶，导致TG清除减少及甘油三酯升高[11]。除此之外，Liu等[12]发现betatrophin与HDL呈负相关。Yi等[13]研究58例非糖尿病及73例新诊断的性别、年龄相匹配的T2DM患者后，相关分析提示betatrophin与HDL呈正相关。相似的，对于胆固醇也有着不同的研究报道。Fenzl等[14]发现肥胖患者血清中betatrophin水平明显增高且与胆固醇呈正相关。而谢心苗[15]研究发现betatrophin与胆固醇呈负相关。总之，betatrophin如何参与脂代谢尚不十分明确，仍需更多的实验去验证。1.3Betatrophin与体重Fenzl等[14]报道betatrophin水平在瘦的和胖的人群是相似的。Fu等[16]研究指出2型糖尿病患者及肥胖患者血betatrophin水平明显升高,并与空腹血糖及胰岛素水平成正相关。Gomez－Ambrosi等[17]将75例糖耐量正常肥胖人群、30例肥胖糖耐量异常人群、15例肥胖T2DM患者与30例瘦的糖耐量正常的人群相比较，结果显示循环血中betatrophin水平在肥胖人群中是降低的，特别是有糖耐量受损的肥胖人群中，betatrophin水平更低。但是Guo等[18]发现T2DM或糖耐量正常的人群中，betatrophin水平在超重组(25≤BMI＜30kg/m2)中明显高于正常体重(BMI＜25kg/m2)组，但在肥胖组(BMI≥30kg/m2)中其水平与正常体重组其水平未见明显差异。Barja－Fernandez等[19]研究显示betatrophin水平与BMI呈负相关，在过度消瘦的神经性厌食女性中升高，在病态肥胖女性患者(BMI＞40kg/m2)中其水平显著降低。Li等[20]对9个试验进行Meta分析，探讨betatrophin水平与2型糖尿病的关系，其亚组分析结果显示betatrophin在非肥胖的2型糖尿病患者中水平升高，而在肥胖的人群中,2型糖尿病患者betatrophin水平与对照组没有显著差异。或许是糖耐量异常对betatrophin的影响被肥胖对betatrophin的影响抵消掉了。综上，血清betatrophin与体29 山西医科大学（博）硕士学位论文重的关系尚需进一步的研究。1.4Betatrophin与胰岛素Fu等[16]研究发现2型糖尿病患者及肥胖患者血betatrophin水平明显升高,并与空腹血糖及胰岛素水平成正相关。糖尿病、肥胖、妊娠、多囊卵巢综合征等疾病中betatrophin的影响越来越受关注。这些疾病本身与高胰岛素及胰岛素抵抗密切相关。但患者体内betatrophin与高胰岛素及胰岛素抵抗之间的关系尚不明确。在人体，Chen等[21]对比糖耐量正常组、空腹血糖受损组、糖调节受损组、新诊断T2DM组病例发现betatrophin与胰岛素抵抗指数呈正相关。在注射胰岛素受体拮抗剂（S961）造成胰岛素抵抗模型的小鼠中，betatrophin水平增加[4,5],胰岛素抵抗刺激betatrophin基因的上调[4]，提示胰岛素抵抗与betatrophin有关。EsPes等[22]的动物实验表明，刺激肝脏分泌betatrophin的是胰岛素抵抗，而不是高血糖。而陈茜[23]进一步对多种方式构建的胰岛素抵抗模型小鼠研究发现，betatrophin水平只有在高胰岛素建立的胰岛素抵抗模型中是升高的。并且，这种betatrophin水平的升高可以被胰岛素作用通路PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002所抑制。从而得出是高胰岛素本身而不是胰岛素抵抗引起了betatrophin的高表达的结论。Ebert等[24]体外研究发现胰岛素刺激已分化的3T3-L1前脂肪细胞表达betatrophin因子mRNA，表现为浓度依赖性及时间依赖性，进一步证明是高胰岛素血症上调betatrophin因子的水平。目前的研究，对于betatrophin与血糖、高胰岛素血症、胰岛素抵抗之间的关系尚不十分明确。2.糖尿病肾病概述在我国，糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）是成人终末期肾病的常见原因，是T1DM的主要死因，在T2DM，其严重性仅次于心、脑血管疾病。DN的基本病理改变包括：肾小球肥大、细胞外基质产生增多和肾小球硬化。微量白蛋白尿是DN最早期的表现，Reiter等[25]研究表明胰岛素信号通路异常是微量白蛋白尿发生发展的重要因素。Jauregui等[26]的研究也表明，肾足细胞胰岛素信号通路异常与微量白蛋白尿的发生相关，肾脏细胞葡萄糖代谢异常与胰岛素敏感性下降相关。这些都表明胰岛素抵抗可能参与了DN的发生发展[26]。30 山西医科大学（博）硕士学位论文近年来脂代谢异常被认为是DN进展的重要危险因素，其机制包括肾小球脂质沉积致泡沫细胞形成、肾内脂肪酸结构改变致肾内缩血管活性物质释放增加及高脂血症改变肾小球血液流变学等。T2DM患者中研究发现甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白等在肾脏的堆积促进糖基化终末产物、炎症因子、多种免疫相关细胞因子、活性氧的生成[27-29]，导致线粒体功能减退、氧化应激的增加、免疫功能紊乱及各激素分泌水平的改变[30,31]，最终导致肾小球硬化、肾小管内皮功能紊乱、肾小管间质损伤。甚至有研究认为甘油三酯及胆固醇随着糖尿病病程的不同，对DN进展有不同的影响[32,33]。此外，年龄与上述线粒体功能障碍、氧化应激增强、炎症、激素改变也存在相关性[34]，随着年龄的增长，免疫功能紊乱，大量细胞因子如白介素-1α、肿瘤坏死因子α及转化生长因子β1的合成和分泌增加，都促使肾小球硬化，促进DN进展[35]。目前DN的发病机制尚未完全阐明，遗传易感性、胰岛素抵抗、高血糖、低度炎症状态、血管内皮细胞功能紊乱、血凝异常等与DN的发生发展密切相关。随着对DN影响因素的深入研究，DN的治疗有望从对症阶段转为分子治疗。3.Betatrophin与糖尿病肾病尿中白蛋白排泄轻度增加是早期DN的特征，随病情进展，逐渐发展至大量白蛋白尿及血清肌酐水平上升，最终发生肾衰竭。Chen等[32]研究发现，T2DM患者中，高水平的betatrophin与受损的肾功能及尿白蛋白排泄率有关，推测betatrophin是一种反应糖肾进程的新型内分泌调节剂。Chen等[30]研究发现，与对照组比较，T2DM组尿白蛋白排泄率（UACR）正常组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组血清betatrophin水平均显著升高，血清betatrophin水平与UACR呈正相关，与肾小球滤过率（eGFR）呈负相关。台湾一项研究也表明，与正常蛋白尿组相比，大量蛋白尿组的betatrophin水平更高，betatrophin与eGFR呈独立负相关[32]。日本一项研究也得出相似结论，betatrophin和肌酐清除率及eGFR（根据日本人群调整的计算结果）呈负相关，但该研究也认为这种结果可能主要是因为这两个因素都与年龄相关所致[36]。同时也有相反的研究结果。Ebert等[37]研究认为在慢性透析T2DM患者betatrophin与GFR呈正相关。也有研究是置疑这种相关性的，因为大量蛋白尿患者betatrophin显著增加可能与尿蛋白丢失加重胰岛素抵抗及对胰岛素需求更多所致，并不能因此认为尿蛋白丢失会造成betatrophin的增加。所以，对于betatrophin与UACR及eGFR是否相关，研究31 山西医科大学（博）硕士学位论文结果尚未统一，其具体关系尚待进一步的研究。随着DN的进展，进入肾衰竭期后，患者往往需要血液透析。Ebert等[37]在研究中发现，与单纯T2DM相比，透析患者betatrophin与eGFR呈正相关，betatrophin水平明显下降。Chen等[32]认为这可能是由于Ebert等研究的样本是血透的慢性肾衰病人，也可能是因为，血透改变了诱导betatrophin生成的诱导物。Ebert等[37]在研究中也发现，在一部分患者中循环betatrophin与血液透析前相比在透析后显著增加，他们也推测可能与betatrophin对透析后的血液动力学变化或代谢变化产生反应而增多。目前关于DN与betatrophin关系的研究相对缺乏，仍需要更多的实验说明。4.小结Betatrophin的水平与多种因素有关，如脂代谢、胰岛素抵抗、高血糖等。较为明确的是betatrophin与甘油三酯水平呈正相关。其他如betatrophin与胰岛β细胞增殖、体重、糖尿病肾病之间的关系仍未达成共识，仍需要更多的研究进一步论证。32 山西医科大学（博）硕士学位论文参考文献[1]RZhang．Lipasin,anovelnutritionallyregulatedliver-en-richedfactorthatregulatesserumtriglyceridelevels［J］．BiochemBiophysＲesCommun,2012,424(4):786-792.[2]QuagliariniF,WangY,KozlitinaJ,GrishinNV,HydeR,BoerwinkleE,ValenzuelaDM,MurphyAJ,CohenJC,HobbsHH.Atypicalangiopoietin-likeproteinthatregulatesANGPTL3.ProcNatlAcadSciUSA.2012;109:19751-19756.[3]ZhangR.Lipasin,anovelnutritionally-regulatedliver-en-richedfactorthatregulatesserumtriglyceridelevels．BiochemBiophysＲesCommun,2012,424：786-792．[4]YiP,ParkJS,MeltonDA.Betatrophin：ahormonethatcontrolspaAreaticbetacellproliferation[J].Cell,2013,153（4）：747-758.[5]JiaoY,LeLayJ,YuM,NajiA,H.KaestnerK.ElevatedmousehepaticbetatrophinexpressiondoesnotiAreasehumanbeta-cellreplicationinthetransplantsetting[J].Diabetes,2014,63（4）：1283-1288.[6]GusarovaV,AlexaCA,NaE,StevisPE,XinY,Bonner-WeirS,CohenJC,HobbsHH,MurphyAJ,YancopoulosGD,GromadaJ.ANGPTL8/betatrophindoesnotcontrolpancreaticbetacellexpansion[J].Cell,2014,159（3）：691-696.[7]CoxAR,LamCJ,BonnymanCW,ChavezJ,RiosJS,KushnerJA.Angiopoietin-likeprotein8（ANGPTL8）/betatrophinoverexpressiondoesnotiAreasebetacellproliferationinmice[J].Diabetologia,2015,58（7）：1523-1531.[8]YiP,ParkJS,MeltonDA.PerspectivesontheactivitiesofANGPTL8/betatrophin[J].Cell,2014,159（3）：467-468.[9]WangY,QuagliariniF,GusarovaV,GromadaJ,ValenzuelaDM,CohenJC,HobbsHH.MicelackingANGPTL8(Betatrophin)manifestdisruptedtriglyceridemetabolismwithoutimpairedglucosehomeostasis［J］．ProcNatlAcadSciUSA,2013,110(40):16109-16114．[10]ZhangR,Abou-SamraAB.Adualroleoflipasin(betatrophin)inlipidmetabolismandglucosehomeostasis:consensusandcontroversy.CardiovascDiabetol.2014;13:133.[11]ZhangR,Abou-SamraAB.Adualroleoflipasin(betatrophin)inlipidmetabolismandglucosehomeostasis:consensusandcontroversy.CardiovascDiabetol.2014;13:133.[12]LiuD,QuH,WangH,DuanY,LiuF,FengZ,DengH.Relationshipbetweenserumbetatrophinlevelsandthefirst-phaseofglucose-stimulatedinsulinsecretion.［J］．ObesResClinPract,2016[Epubaheadofprint][13]YiM,ChenRP,YangR,GuoXF,ZhangJC,ChenH.BetatrophinActsasaDiagnosticBiomarkerinType2DiabetesMellitusandIsNegativelyAssociatedwithHDL-Cholesterol[J].InternationalJournalofEndocrinology,2015,2015:479157-479164.33 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山西医科大学（博）硕士学位论文致谢本课题是在我的导师郭志新教授的精心和悉心关怀下完成的。导师严谨的科研思路、实事求是的治学态度、渊博的学识、敬业的精神、对科研工作敏锐的洞察能力是我毕生学习的楷模。在此，对导师三年来对我学术上的精心指导与生活上的关怀表示最崇高敬意和最衷心的感谢。感谢内分泌科全体老师对课题顺利完成提供的帮助及指导。感谢师姐师弟妹及同门的帮助与支持，是他们的倾情相伴，使我愉快的度过了我的研究生生活。感谢我的父母、家人及男友的支持与理解，是他们为我前进提供了坚强后盾，让我可以走的更远，站的更高。36 山西医科大学（博）硕士学位论文在学期间承担/参与的科研课题与研究成果研究成果[1]刘娜，郭志新，梁登耀，贾发婧，邢健.2型糖尿病视网膜病变患者血清betatrophin水平变化及意义.(已投中国卫生统计.待录用).37 山西医科大学（博）硕士学位论文个人简历梁登耀，女，1992年02月18日出生，汉族，山西省晋中市人。2010年09月考入长治医学院临床医学系专业，2015年07月本科毕业并获得学士学位。2015年09月考入山西医科大学第二临床医学院内分泌专业，攻读硕士研究生。37