DB22T 1589-2012 高粱品种鉴定 DNA 指纹法（SSR）

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1、ICS65.020B05备案号：35077-2012DB22吉林省地方标准DB22/T1589—2012高粱品种鉴定DNA指纹法（SSR）Identificationofsorghum(Sorghumbicolor(L.)Moench)varietiesusingDNAfingerprintingmethod(SSR)2012-09-15发布2012-10-31实施吉林省质量技术监督局发布DB22/T1589—2012前言请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T

2、20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院农业部植物新品种测试(公主岭)分中心、农业生物技术研究所。本标准主要起草人：李晓辉，王凤华，张春宵，周海涛，郝彩环，王威，侯佳明，王晶。IDB22/T1589—2012高粱品种鉴定DNA指纹法（SSR）1范围本标准规定了利用简单重复序列（SSR,simplesequencerepeat）分子标记进行高粱(Sorghumbicolor(L.)Moench)品种DNA指纹鉴定的试验方法、数据采集、结果记录及判定标准。本标准适用于高粱各类材料

3、的DNA分子数据采集和品种鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1核心引物coreprimer多态性、稳定性、重复性等综合特性好，可作为DNA指纹鉴定优先选用的一套SSR引物，包括基本核心引物和扩展核心引物。基本

4、核心引物是用于品种建库和鉴定，并且保证不同实验室数据具有可比性，可进行数据整合的一套统一固定引物。扩展核心引物是可根据引物的最新研究结果和特殊鉴定性状进行调整的一套相对固定的引物。3.2参照品种referencecultivar用于确定等位变异，校正仪器设备的系统误差,对应于特定SSR位点上大小已知的不同等位变异的一组品种。4原理从高粱种子、幼苗、叶片等组织中提取DNA，利用普通或荧光染料标记的SSR引物进行PCR扩增。不同长度的PCR扩增片段通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，经硝酸银染色或者荧光染料标记检测区分开来。不同高粱品种由于遗传组成不

5、同，在基因组DNA的多个SSR位点中，一些位点的简单重复序列的重复次数有差异，这种差异可通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳区分，从而对不同品种进行区分鉴定。1DB22/T1589—20125试剂与材料除另有说明外，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1十六烷基三乙基溴化铵（CTAB:C16H33(CH3)3NBr）。5.1.2乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2·2H2O:C10H14N2Na2O8·2H2O）。5.1.3三羟甲基氨基甲烷（tris-base:C4H11NO3）。5.1.4氢氧化钠（NaOH

6、）。5.1.5氯化钠（NaCl）。5.1.6琼脂糖（agarose）。5.1.7溴酚蓝（brphblue:C19H10Br4O5S）。5.1.8二甲苯青FF（C25H27N2O6S2Na）。5.1.9甲叉双丙烯酰胺（bisacrylamide:(H2C=CHCONH)2CH2）。5.1.10丙烯酰胺（C3H5NO）。5.1.11硼酸（boricAcid:H3BO3）。5.1.12尿素（CH4N2O）。5.1.13过硫酸铵（APS:(NH4)2S2O8）。5.1.14乙酸铵（CH3COONH4）。5.1.15硝酸银（AgNO3）。5.1.16三

7、氯甲烷（CHCl3）。5.1.17异丙醇（C3H8O）。5.1.18异戊醇（C5H12O）。5.1.19盐酸（HCl）：37%。2+5.1.2010×Buffer缓冲液:含Mg25mmol/L。5.1.21四种脱氧核苷三磷酸:dATP、dTTP、dGTP、dCTP（10mmol/Leach）。5.1.22TaqDNA聚合酶：2U/μL。5.1.23矿物油。5.1.24去离子甲酰胺（formamide:HCONH）。5.1.25亲和硅烷（bindingsilane）:97%。5.1.26剥离硅烷（repelsilane）:2%二甲基二氯硅烷（C

8、2H6Cl2Si）。5.1.27无水乙醇（C2H6O）。5.1.28四甲基乙二胺（TEMED:C6H16N2）。5.1.29冰醋酸（C2H4O2）。5.1.30甲醛