二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜的形态学影响

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1、二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜的形态学影响MOMBffi李冰冰北京中医药大学东直Q医脘北哀菡大学a的从形态学角度探讨二补助育汤对胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜的影响。方法将56只C57小鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、阿司匹林组、二补助育汤低、中、高剂量组，每组8只。用吲哚美辛建立胚胎着床障碍动物模型，小鼠妊娠第5日下午脱颈椎处死，计算各组小鼠妊娠率及胚胎着床位点数;光学显微镜下观察各组小鼠f宫内膜形态结构;透射电子显微镜下观察超微结构、胞饮突表达情况，并计算胞饮突评分。结果（1）模型组平均着床位点数（1.8±2.1）

2、明显低于空白组（8.1±4.2）（P<0.05）:中药中、高剂量组平均着床位点数（分别为62.5%,75.0%）明显高于模型组（P<0.05）:与补佳乐组和阿司匹林组间无统计学差异。（2）光学显微镜下形态学观察:正常组内膜间质疏松、腺体和血管丰富、腺体扩张;模型组内膜变薄或消失、腺体和血管减少;二补助育汤各剂量组、补佳乐组、阿司匹林组内膜均有改善，以二补助育汤屮剂量组与正常组最接近。（3）电子显微镜下超微结构观察:空G组子宫内膜上皮细胞及细胞器结构清晰；模型组细胞破坏严重甚至局灶性坏死，线粒体膜不完整、嵴结构消失，胞质中较多空

3、泡样变，核糖体和内质网明显减少;二补助育汤各剂量组、补佳乐组、阿司匹林组细胞及细胞器有不同程度破坏，与模型组相比有明显改善。（4）胞饮突：空闩组胞饮突丰富，绒毛较少;模型组绒毛丰富，但胞饮突很少;二补助育汤各剂量组胞饮突较模型组丰富，见少量绒毛;补佳乐组和阿司匹林组可见少量胞饮突，较模型组增加，绒毛表达稀疏。（5）胞饮突评分:模型组胞饮突评分（1.1±0.3）较空白组低（2.5±0.7）（P<0.05）;中药中剂量组（2.3±0.9）、阿司匹林组（2.0±0.7）评分高于模型组（P〈0.05）,亦高于补佳乐组（1.3±0.5）

4、（P<0.05）。结论二补助育汤能够促进子宫内膜发育及胞饮突，从而提高子宫内膜容受性，有利于胚胎着床。关键词:二补助育汤;胚泡着床障碍;了宫内膜容受性;形态学;胞饮突;除胚胎质量外，子宫内膜容受性是影响ART成功的重要因素U1，如何提高子宫内膜容受性成为近年相关研宄的焦点和难点问题。二补助育汤m是北京中医药大学东直门医院名老中医肖承惊教授治疗子宫内膜容受性低下的经验方，前期临床研宄表明m，该方药能改善患者临床症状、增加子宫内膜厚度，提高再次体外受精-胚胎移植(invitrofertilization-embryotransfe

5、r,IVF-ET)成功率;前期实验研宂表明［4-5］，该方药通过干细胞生长因子(stemcellfactor,SCF)、同源框基因等靶点改善子宫内胶容受性。为了从形态学角度探讨该方药对子宫内膜容受性的影响，我们进行了以下实验研究。1材料与方法1.1实验动物选择6飞周龄SPF级C57雌性小鼠56只，未交配过，雄性证明有生育能力，雌性体质量(20±2)g,雄鼠体质量(25±2)go由北京维通利华实验技术有限公司提供。小鼠饲养环境温度为(22±2)°C,湿度为12/12h光照/暗循环，可以自由获取食物和饮水。本动物实验严格按照北京中

6、医药大学东直门医院实验动物管理与监督委员会的指导原则进行，并获得医院动物伦理委员会的批准。1.2药物1.2.1二补助育方由补骨脂、骨碎补、巴戟天、桑寄生、川断、川牛膝等药物组成，颗粒制剂购置于北京屮医药大学东直门医院门诊药房。用0.5%羧甲棊纤维素钠加热溶解，边加热边搅拌，使其均匀。浓缩药液浓度（含生药量）分别为1.5g/mL、3g/mL、6g/mL3种浓度，放入4°C冰箱保存。1.2.2补佳乐（戊酸雌二规格1mg/片，由法国DELPHARMLilleS.A.S.制药公司生产。取1.5mg放在研钵屮研碎，溶于50mL的5g/L

7、羧甲基纤维素钠屮，搅拌均匀，制成浓度为0.03g/L溶液。1.2.3阿司匹林肠溶片规格100mg/片,由德国BayerS.p.A.制药公司生产。取500mg放在研钵中研碎，溶于50mL的5g/L狻甲基纤维素钠中，搅拌均匀，制成浓度为10mg/mL溶液。1.2.4吲哚美辛油栓规格100mg/粒，由北京双吉制药有限公司生产。溶于100mL麻油中配制成浓度为1g/L的汕剂。1.3试剂与仪器体积分数4%多聚甲醛、2.5%戊二醛均购白北京索莱宝科技有限公司；光学显微镜（型号BX60）为日本Olympus公司产品；透射电子显微镜（型号H-

8、7650）为日本Hitachi公司产品。1.4模型建立、分组及给药1.4.1模型建立空闩组于妊娠第3日、妊娠第4口每口9:00及16:00皮K注射0.13mL麻油，其余各组相同时间皮下注射0.13mL吲哚美辛麻油溶剂，制成胚泡着床障碍模型［6-7］。1.4.2分组与给药每H1