基于小鼠模型探析哮喘的发病机制

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1、基于小鼠模型探析哮喘的发病机制[摘要]目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/真核生物始动因子4E结合蛋白1（4EBP1）/缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/血管内皮生长因子（VEGF）信号通路在哮喘小鼠中的表达及意义。方法40只SPF级6~8周龄雌性Balb/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、布地奈德干预组及mTOR抑制剂（雷帕霉素）干预组，每组10只。卵清蛋白致敏激发建立哮喘小鼠模型，各干预组分别在激发前30min给予雷帕霉素3mg/kg腹腔注射或布地奈德混悬液1mg雾化吸入，对照组和哮

2、喘组以生理盐水代替。于末次激发24h后处死小鼠，收集肺泡灌洗液（BALF），采用ELISA法测定HIF-1α、VEGF水平；取肺组织行苏木精-伊红（HE）染色观察其病理变化；免疫组化染色和ethodsFortySPFlevel6-8aleBalb/Cmicelydividedintocontrol,asthma,budesonideandmTORinhibitor（rapamycin）interventiongroups（n=10each）。Theasthmaticmousemodelinisteredy

3、cinatthedosageof3mg/kgbyanintraperitonealinjectionorbudesonidesuspensionatthedosageoflmgbyaerosolinhalationrespectively30minutesbeforetheOVAchallenge.Thecontrolandasthmagroupsalsalineinstead.TheconcentrationsofHIF-1αandVEGFinbronchoalveolarlavagefluid（BAL

4、F）inedusingELISA24hoursafterthelastchallenge.Thepathologicalchangesoflungtissueatoxylin-eosin（HE）staining.Thep-mTORandp-4EBP1fromthelungtissuesmunohistochemistryandammaliantargetofrapamycin;Eukaryoteinitiatingfactor4Ebindingprotein1;Hypoxiainduciblefactor-1&alp

5、ha;；Vascularendothelialgroammaliantargetofrapamycin,mTOR）是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，由于处于生长调节的中心环节而倍受关注,在炎症损伤、免疫应答及肿瘤等方面发挥重要作用[2-3].研究发现mTOR高表达也同样存在于哮喘中，这可能因为mTOR参与了哮喘气道炎症浸润及气道重塑等病理过程[4],而mTOR抑制剂雷帕霉素能阻断这一过程抑制哮喘的发生，但mTOR是如何通过下游靶蛋白参与哮喘的发生少见相关报道。真核生物始动因子4E结合蛋白1（eukaryotei

6、nitiatingfactor4Ebindingprotein1,4EBP1）是mTOR下游的一个重要靶蛋白，激活后可促进包括缺氧诱导因子-1α（hypoxiainduciblefactor-1α，HIF-1α）、血管内皮生长因子（vascularendothelialgroTOR可能通过激活4EBP1从而引起HIF-1α及VEGF表达增加促进哮喘发生，而磷酸化的mTOR、4EBP1（即p-mTOR、p-4EBP1）被认为是该信号通路激活的标志，本研究通过建立小鼠哮喘模

7、型，检测肺组织p-mTOR、p-4EBP1及肺泡灌洗液中HIF-1α、VEGF的表达，从而进一步明确哮喘的发病机制，寻找有效治疗哮喘的新方法。　　　　1材料与方法。　　　　1.1实验动物与试剂。　　　　SPF级6~8周龄雌性Balb/c小鼠40只，体重为18~22g,由河南省动物实验中心提供。p-mTOR、p-4EBP1抗体（美国SantaCruz公司），雷帕霉素、卵清蛋白（OVA）（美国Sigma公司）。　　　　1.2动物模型制备与分组。