百合多糖的分离纯化及抗肿瘤作用

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1、百合多糖的分离纯化及抗肿瘤作用【关键词】百合多糖；分离纯化；抗肿瘤作用ABSTRACT:ObjectiveToisolateandpurifycrudelilypolysaccharideandobserveantitumoractivityoftheisolatedandpurifiedpolysaccharide.MethodsCrudelilypolysaccharidelilybyinarypurificationofcrudelilypolysaccharideatography,preliminarypurificationice.T

2、heeffectsofpurifiedlilypolysaccharideontumormunefunctionatography,thepurifiedpolysaccharideshoonstratingitshomogenicity.Thepurifiedlilypolysaccharideshoicetumorgromuneorgansandimprovedtheimmunefunctionofthemice.ConclusionThepurifiedlilypolysaccharideogeneous.ItcouldinhibitH22t

3、umorgromunefunctionsinH22bearingmice.Thisresearchhaslaidthefoundationforfurtherpharmacologicalstudyonlilypolysaccharide.KEYoractivity百合中主要含有酚酸甘油酯、苷类、生物碱及多糖，另外还含有一些磷脂、蛋白质和无机元素。对百合保健功能的研究已开始从单纯药理研究向保健功能成分的研究转变。国外已从百合植物碱中分离得到秋水仙碱，并对其抗癌作用做了研究。另有研究表明，从百合中提取的皂苷具有止咳、平喘等功能，而作为百合中主要功能

4、成分之一的百合多糖的组成却不是很明确。本研究从百合粗多糖中分离出百合中性多糖、百合弱酸性多糖、酸性多糖及蛋白质，并对中性多糖进行了抗肿瘤及非特异性免疫调节研究。1材料与方法1.1主要试剂与仪器百合粗多糖干燥制剂(自制)；DEAE纤维素(上海生化试剂公司)；SephadexG200(上海生物工程公司)；其他试剂均为国产分析纯。大容量离心机、旋转蒸发器、烘箱、透析袋(截留分子质量8000，华美生物工程公司)；磁力搅拌器、HL2Bcm数显恒流泵、梯度混合仪、SBS100自动分部收集器(上海沪西分析仪器厂)。1.2实验动物ICR封闭群小鼠，清洁级(

5、合格证号：陕医动字：08004)，体重18～22g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供；H22种鼠由第四军医大学实验动物中心提供。1.3方法1.3.1百合多糖的提取及分离纯化采用水提醇沉法，得水溶性百合粗多糖。百合粗多糖经Sevag法除蛋白8次，经透析、冷冻干燥后，得到初步纯化的百合多糖。采用DEAE纤维素柱分离法[1]对冷冻干燥物进行分离纯化。取定量DEAE纤维素，用蒸馏水浸泡，再用0.5mol/LNaOH及0.5mol/LNaCl混合液处理30min，抽干后用蒸馏水洗至中性，0.5mol/LHCl溶液处理30min，抽干后用蒸馏水洗至中

6、性。用pH6.0磷酸盐缓冲溶液处理后，脱气装柱(2.5cm×50cm)。把冷冻干燥物溶于蒸馏水，制成0.5g/L水溶性百合多糖溶液。准确吸取该溶液2mL上样，5min后待多糖渗入DEAE纤维素后以蒸馏水洗脱，流速为0.5mL/min，每管5mL，各管用蒽酮硫酸法检测，直至无洗脱峰为止。再用0.1mol/L和0.5mol/L的NaCl溶液洗脱弱酸性多糖，最后用0.5mol/L的NaOH溶液洗脱酸性多糖及蛋白质类物质。在各过程中，均用蒽酮硫酸法检测多糖，并用紫外分光光度计在280nm处对蛋白质类物质的洗脱情况进行监测。将用蒸馏水洗脱的洗脱液按洗脱峰进

7、行收集得纯化的百合多糖，其为百合中性多糖。1.3.2百合中性多糖的纯度测定凝胶层析柱法[23]检验纯度。取SephadexG200凝胶柱(1.5×45)层析。使用前用0.05mol/LNaCl平衡2d，流速为5～6mL/h，取纯化的百合多糖3mg溶于最小体积的0.05mol/LNaCl中，上柱，用0.05mol/LNaCl溶液洗脱，流速8mL/h，按2mL/管分部收集，并每管以蒽酮硫酸法跟踪检测糖含量，观察洗脱峰以检验纯度。1.3.3免疫器官重量及肿瘤抑制率的测定取接种7d的种鼠腹水癌细胞，用生理盐水制成细胞数为1×106个/mL的细胞悬液，以

8、每鼠0.2mL接种于小鼠右腋皮下，24h后随机分为正常组、肿瘤模型对照组、不同剂量纯化百合多糖给药组[50、100、200