大蒜素在体外对棘阿米巴的杀伤作用

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1、大蒜素在体外对棘阿米巴的杀伤作用【关键词】棘阿米巴；大蒜素；体外　　TheEffectofAllitridiumagainstAcanthamoebainvitro　　　Abstract:ObjectiveTodetecttheeffectofallitridiumonAcanthamoebaspp.MethodsAcanthamoebaspp.,theinfluenceofallitridiumonthemorphologicalfeature,proliferationspeedculturedfor3h,theAcanthamoebatrophozoitesch

2、angedtocystsandinthe10g/Lallitridiumgroupcelldestroyingcouldbedetected.Cellproliferationcouldnotdetected.ConclusionAllitridiumiseffectivetodestroyAcanthamoebainvitro.　　Keyoeba;Allitridium;invitro　　棘阿米巴（Acanthamoeba）是一种广泛分布于自然环境中的自由生活的机会致病性原虫。致病性的棘阿米巴可引起人体肉芽肿性阿米巴性脑炎(GranulomatousAmoebicE

3、ncephalitis，GAE)和棘阿米巴性角膜炎(AcanhtamoebaKeratitis，AK)。自从Nagington等和Jones等率先报道了由棘阿米巴引起的眼部感染病例以来，随着AK患者的不断增加，对棘阿米巴的研究引起了有关学者的广泛关注。目前报道至少已发现了26种棘阿米巴，其中常引起人体感染的主要是卡氏棘阿米巴（A.caslellanii）和多噬棘阿米巴(A.polyphaga)。　　大蒜为百合科葱属植物的鳞茎，长期以来被认为有抗细菌、抗真菌和抗寄生虫作用［1］，它的主要生物活性物质是含硫化合物。现代药物化学研究证明，大蒜内含硫成分多达三十余种，其中二烯

4、丙基三硫化物普遍认为作用最强，通常将其称为大蒜素。有报道大蒜素对组织内阿米巴、锥虫、兰氏贾第虫、卡氏肺孢子虫、隐孢子虫和弓形虫发挥一定的抑制和杀伤作用［1～3］。本实验观察大蒜素在体外对棘阿米巴原虫的影响。　　1材料与方法　　1.1材料卡氏棘阿米巴由韩国庆北大学寄生虫学教研室郑东一教授提供。大蒜素为上海禾丰制药有限公司产品，批号为5E38001。　　1.2方法　　1.2.1棘阿米巴的培养参照文献［4］方法培养。　　1.2.2对棘阿米巴形态的影响对数期生长的棘阿米巴调整细胞悬液浓度2.5×105/ml，加入24孔细胞培养板中每孔1ml。实验组分别每孔加入0.01，0.1

5、，1，10g/L大蒜素1ml；对照组加等量的PYG培养液(proteosepeptone-yeasteatract-glucose，PYG)，30℃培养3h，在倒置显微镜下观察棘阿米巴的形态改变。　　1.2.3对细胞增长速率的影响用定量培养法观察。将对数期生长的棘阿米巴调整细胞悬液浓度为0.5×105/ml，加入24孔细胞培养板中，每孔1ml。实验组分别加入0.01，0.1，1，10g/L大蒜素1ml；对照组加等量的PYG，每组设4个平行孔。30℃培养24h时,制作棘阿米巴生长曲线，并接种于固体培养基，观察其生长情况。　　2.2对棘阿米巴增殖速率的影响用不同浓度的大蒜

6、素作用24h后进行培养，制作生长曲线。结果见图1。接种后6h对照组和0.01g/L组可见棘阿米巴生长，而其他实验组均未见棘阿米巴生长；对照组棘阿米巴数量在24h内约增加了5倍，而0.01g/L组在24h内出现细胞生长抑制，24h后数量明显增加，与对照组生长趋势几乎相似；0.01g/L组接种后24h，可见棘阿米巴增殖；1g/L和10g/L组接种后4d仍未见棘阿米巴生长。将在30℃培养24h的对照组、0.1g/ml、1g/ml组，各50ml细胞悬液离心固定后，又加以空白管对比观察，发现沉淀细胞数量有显著差异。　　3讨论　　棘阿米巴可引起眼部和中枢神经系统的亚急性或慢性感染

7、。棘阿米巴引起的GAE常发生于体质虚弱的老年人或因肿瘤、慢性消耗性疾病或AIDS等原因免疫功能低下的人群中机会致病，而AK常发生于健康人，是一种严重威胁视力的致盲性角膜病。　　图1大蒜素对棘阿米巴生长曲线的影响（略）　　棘阿米巴原虫形态包括活动期的滋养体和静止期的包囊两个阶段,当药物作用于棘阿米巴滋养体时会迅速转化为包囊。文献报道多数药物仅对棘阿米巴滋养体有杀伤作用，而对包囊的作用较弱。在体外实验中已证明PHMB、洗必泰、两性霉素、巴龙霉素、罗他霉素、羟乙磺酸丙氧苯脒、咪康唑以及地咪类等［5～6］药物药物对棘阿米巴有效，但其效果不理想。目前认为PHM