降血压肽ace抑制活性及降压功能研究

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1、降血压肽ACE抑制活性及降压功能研究【摘要】探讨了ACE（血管紧张素转换酶）抑制活性的检测方法,并以贻贝为原料制取降血压肽，研究了不同酶解条件对其ACE抑制活性的影响，然后利用SHR饲喂试验检测其降血压活性。结果表明，降血压肽有较好的ACE抑制活性：其ACE抑制率可达88.08%。同时动物试验表明其降压效果明显,在SHR饲喂后2～6h之内均有显著降压效果，平均降低为16～28mmHg。【关键词】降血压肽血管紧张素转换酶抑制活性降血压【Abstract】ThetestingmethodofACEinhibitor

2、yactivitiesmytiluscoruscus,thentheACEinhibitoryactivitiesethod.TheresultsmHg.【Keye（ACE）inhibitoryactivities；antihypertensiveeffects降血压肽实质是一种血管紧张素转换酶抑制肽，它通过抑制血管紧张素转换酶（ACE），阻碍有升高血压作用的血管紧张素Ⅱ的生成，同时抑制具有降血压作用的血管舒缓激肽的分解，从而使血压下降，此即降血压肽的作用机理［1］。近年来国际学术界对降血压肽的研究较多，已报道

3、有以牛奶、乳酪、大豆、鱼肉、蔬菜、小麦蛋白等食物为原料，经蛋白酶酶解产生了具有较好ACE抑制活性的降血压肽［2～7］。Eiji等［8］水解了12种食物蛋白进一步研究发现，从鱼肉、虾、蟹等水产动物蛋白中制得的降血压肽其降压活性优于其他食物性蛋白。我国在降血压肽领域的研究起步相对较晚，现有报道以大豆、蛇毒、老酒、茶叶为原料，对降血压肽的制备工艺和活性基团等方面进行了一定研究［9～13］；对于最适合用于降血压肽制备的水产动物蛋白的开发研究，则鲜有报道。贻贝，又名海红、淡菜，近年来人工养殖取得重大成功，在我国东南沿海产

4、量丰富。但由于加工手段和技术的落后，在收获季节产出的大量贻贝因得不到及时处理而造成极大浪费［14］。本研究以贻贝为原料，经酶解、活性修饰等方法制取降血压肽，然后利用SHR饲喂试验检测其降血压活性，并分析了其相对分子质量分布和氨基酸组成，以期为贻贝酶解降血压肽的开发提供理论探索。1材料与方法1.1材料与设备贻贝：市售。ACE标准样品：Sigma试剂。　　复合生物酶P1（本项目组自行配制），其组分均购自上海生物化学试剂公司。降血压肽制备所需其他试剂，均为生化纯，上海生物化学试剂公司提供。降压功能试验用动物：SHR（

5、自发性高血压大鼠），上海高血压研究所提供。仪器设备：HPLC（A1,提取，冷冻干燥，制备降血压肽，以备分析检测之用。将制备的降血压肽样品利用SHR饲喂试验来分析其降压活性。1.3实验方法1.3.1ACE活性抑制检测方法研究取标准HippuricAcid样品（光谱级），配制成0.1M溶液，参考前述有关3结论3.1ACE抑制活性检测方法的研究分析0.01～0.05mM和0.10～0.50mM的数据，可发现HippuricAcid在浓度范围为0.01～0.05mM内线性最佳，因此应控制有关反应使最终的Hippuric

6、Acid浓度在此范围之内，提高检测的准确性。3.2P1酶最佳酶解条件对于ACE抑制结果进行回归分析，所得回归方程为:Y=70.464-1.195X1+15.299X2+11.971X3-4.310X22+0.194X1X2-0.141X3X4根据方程分析最佳的ACE抑制活性为90.23%。但由实验结果在此条件下的实际ACE抑制率为86.55%,所以NO1为最佳条件。其ACE抑制率为88.08%，对应的最佳酶解条件为：酶量25IU/ml；酶解时间2h；pH7.0；酶解温度60℃。具体分析P1的酶解情况，酶量从25

7、IU/ml到175IU/ml，酶解时间2～7h,随着酶量的增加和酶解时间的延长，其酶解程度增加，但所得降血压肽的ACE抑制率下降。这是因为随着酶解的进行,蛋白质逐渐被水解成不同长度的肽断，其中部分因结构上的某些活性基团而具有降血压活性；但随着酶解程度提高，部分具有ACE抑制活性的短肽被酶解成氨基酸或其活性基团被破坏，从而导致其ACE抑制活性下降。这一点与Kim等［18］通过牛皮胶制备酶解降血压肽的研究得到的结论相吻合，在酶解过程中控制酶解程度非常重要，既要使蛋白质得到充分的酶解，使更多的活性肽断被水解出来，但同

8、时又要适当控制酶解程度，即并非酶解程度最大时其降压活性最好。3.3降血压肽的降压效果由方差分析结果，查表得F0.05（2,9）＝4.26，可知对于处理4h和6h血压变化的F值＞F0.05（2,9），说明服用降血压肽4h和6h效果差异有显著性（α＝0.05）。同时，由上述实验结果可知，降血压肽在2～6h之内均有显著降压效果（α＝0.05），平均降低为16～28mmHg。在6h处降压效果达