胶原诱导性关节炎小鼠th17细胞的检测及意义

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1、胶原诱导性关节炎小鼠Th17细胞的检测及意义：史烨马洁苏兆亮杨先知马斌田洁刘艳刘青玲邵启祥许化溪吕力为王胜军【摘要】目的：研究Th17细胞及其相关细胞因子白细胞介素17(IL17)在胶原诱导性关节炎(collageninducedarthritis,CIA)小鼠体内的变化。方法：利用Ⅱ型胶原蛋白建立小鼠CIA模型。应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中IL17的含量。结果：CIA小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例分别为(3.19±0.70)%、(3

2、.54±0.97)%，显著高于正常对照组的(0.95±0.34)%、(1.31±0.47)%,P<0.01。CIA小鼠血清中IL17的含量也明显高于正常对照组(P<0.05)。结论：Th17细胞及其分泌的细胞因子IL17在CIA小鼠体内明显升高，并与疾病的发生密切相关。【关键词】Th17细胞;白细胞介素17;胶原诱导性关节炎　　[Abstract]Objective:TostudytheexpressionofTh17cellsandtheircytokines(IL17)inthedevelopmentofcollag

3、eninducedarthritis(CIA)inmice.Methods:TheCIAmodelsmunizedphnodesinedbyfloetry,andtheconcentrationofIL17intheseruminedbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)respectively.Results:paredalgroup,CIAmicehadasignificantlyhigherpercentageofTh17cellsinspleensanddraininglymphnodes

4、(P<0.01)andhadanincreasedconcentrationofIL17intheserum(P<0.05).Conclusion:ThereiceofCIA,entofthedisease.　　[Keyatoidarthritis，RA)是一种以关节滑膜炎症为特征的慢性自身免疫性疾病。炎症反复发作可导致关节内软骨和骨的破坏，并伴有关节功能障碍。目前的研究表明，T细胞异常免疫应答在RA发生发展中发挥关键作用。Th17细胞是近年发现的一种不同于Th1、Th2细胞的新型CD4+效应性T细胞亚群，主要分泌IL17A

5、/F，IL6，TNF等细胞因子，这些前炎症细胞因子可以促进宿主炎症反应并加剧自身免疫性疾病的发生[1]。小鼠胶原诱导性关节炎(collageninducedarthritis,CIA)是当前研究RA较理想和最为常用的动物模型，它在临床症状和病理表现方面与RA极为相似或相同。本文在建立CIA模型基础上，采用流式细胞术(FCM)检测CIA小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CIA小鼠血清中IL17含量，分析Th17细胞及其相关细胞因子与小鼠CIA发病的关系。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.

6、1实验动物SPF级近交系DBA/1小鼠12只，雄性，6～8周龄，购于上海斯莱克实验动物有限公司，随机分为正常对照组和CIA模型组，每组6只。　　1.1.2主要试剂PE标记抗小鼠CD4抗体，FITC标记抗小鼠IL17A抗体及其相匹配的同型对照抗体，Foxp3染色试剂盒，莫能霉素(monensin),小鼠IL17A的ELISA检测试剂盒均购自eBioscience公司。离子霉素(ionomycin)、乙酸肉豆蔻佛波醇(phorbolmyristicacetate,PMA)购自Sigma公司。BovinecollagentypeⅡ(牛Ⅱ型胶原

7、)购自Chondrex公司。RPMI1640培养液、小牛血清购自Gibco公司。　　1.2方法　　1.2.1小鼠CIA模型的建立及处理取等体积CⅡ与弗氏完全佐剂1∶1混合，充分研磨至混合物完全乳化，以乳化物滴入水中不松散为度(冰浴中操作)，取乳化后的CⅡ于小鼠尾根部皮内注射(0.1ml/只)，并使乳化物吸收完全。于免疫后第21天，利用CⅡ与弗氏不完全佐剂的乳化物加强免疫。从加强免疫后开始，每隔2天对每只小鼠4个足爪进行评分，直至首次免疫第56天为止。具体标准如下[2]：0，关节无红肿;1，关节轻度红肿;2，关节中度红肿;3，关节重度红肿;

8、4，关节畸形。每个足爪最高分为4分，每只小鼠最高分为16分。　　1.2.2小鼠脾脏及引流淋巴结中CD4+IL17细胞比例的检测分离小鼠脾细胞及引流淋巴结细胞，ACK裂解红细胞，