肾康丸对糖尿病肾病大鼠肾脏tgfβ1-smad7通路的影响

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1、肾康丸对糖尿病肾病大鼠肾脏TGFβ1/Smad7通路的影响【关键词】肾康丸；糖尿病肾病；TGFβ1/Smad信号通路　　Abstract:ObjectiveToexploretheeffectsoftheShenkangad7signalingpathodelslydividedinto3groups：modelcontrolgroup；CapotengroupandShenkangeotherratsalcontrolgroup.Allratsinisteredinistration，thek

2、idneysoftheratsad7ethodofimmunehistochemistry.ResultsTherenaltissueproteinexpressionsofFNandTGFβ1intheratsofDNmodelgroupalgroup.）患者临床常见而难治的微血管并发症，是导致终末期肾病（ESRD）和DM患者死亡的主要原因［1］。如何有效预防DN发生发展,具有重要意义。肾康丸在临床治疗DN患者多年，疗效确切。临床观察和动物实验研究都表明，该药在一定程度上可改善DN一般症状，保护

3、肾脏，延缓DN的进展［2，3］。本研究通过动物实验，从TGFβ1/Smad信号通路出发，进一步探讨肾康丸治疗DN的作用机制，为其临床应用提供实验依据。　　1材料与方法　　1.1实验动物　　　　SPF级2135型超薄组织切片机、DMIRB型倒置显微镜、MPS30型照相机，LEICA公司。　　1.4方法　　　　按65mg·kg-1腹腔内一次性注射链脲佐菌素（STZ）制作DM大鼠模型。STZ用枸橼酸钠缓冲液（0.1mol·L-1，pH4.5）配制。另设正常对照组（n＝8只）。连续喂养2周，测血糖、尿糖

4、、尿量，若血糖值高于16.7mmol·L-1、尿糖（+++）以上、尿量增加1倍以上，则造模成功。造模成功后，随机分为3组：模型对照组、开搏通组和肾康丸组。开搏通、肾康丸组分别按5mg·kg-1、1.2g·kg-1（按照人与大鼠体表面积换算，分别相当于70kg成人37.5mg·d-1、12g·d-1）质量灌服相应药物，连续8周。对照组灌服等容积生理盐水。末次给药后12h，麻醉，取左肾，10%(φ)甲醛中性缓冲液中固定，待做免疫组化检测。　　1.5.2免疫组化法检测肾脏组织TGFβ1、Smad7蛋白的

5、表达　　方法同FN蛋白的测定，只是抗原修复用0.01mol·L-1枸橼酸枸橼酸钠缓冲液（pH6.0）进行，一抗分别为兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体和兔抗大鼠Smad7多克隆抗体。　　2结果　　2.1大鼠肾脏组织FN蛋白表达情况　　　　正常组大鼠肾脏FN在肾小球基底膜、系膜基质区有微弱表达，着色较浅。模型组在肾小球基底膜、系膜基质区有极强阳性表达，着色极深，说明FN蛋白表达增强。各治疗组FN在上述部位有弱阳性表达，着色较浅，说明经肾康丸和开搏通治疗后可以减少DN大鼠FN蛋白的表达。见图1。　　2.2

6、大鼠肾脏组织TGFβ1蛋白表达情况正常组大鼠肾脏在肾小球和肾小管上皮细胞中均有TGFβ1蛋白表达，但量较少，着色较浅。模型组大鼠在上述部位的TGFβ1蛋白表达量增加，呈极强阳性表达，着色较深。各治疗组TGFβ1在上述部位也有弱阳性表达，介于正常大鼠和模型大鼠之间，说明经肾康丸和开搏通治疗后可以减少DN大鼠TGFβ1蛋白的表达。　　2.3大鼠肾脏组织Smad7蛋白表达情况　　　　正常大鼠肾脏可见Smad7蛋白表达的阳性颗粒，主要见于肾小球和肾小管，着色较深，表达量较多。与正常大鼠相比，模型组

7、在上述部位的Smad7蛋白的阳性颗粒明显减少，说明DN大鼠肾脏组织中Smad7蛋白表达减少。各治疗组Smad7蛋白的表达有所增强，说明肾康丸和开搏通可以增加Smad7蛋白的表达。　　3讨论　　　　转化生长因子β1（transforminggroatrix，ECM）积聚，是DN发病过程中的重要因子［4］。无论是在STZ诱发的DM大鼠的肾脏，还是在自发性DM大鼠（BB）以及自发性DM小鼠（NOD）的肾脏，TGFβ1mRNA的表达和其蛋白质含量均明显升高，同时伴肾脏肥大和ECM增多［5］。　　　　Sma

8、ds家族蛋白是新近发现的参与TGFβ超家族在细胞内信号传导的一族蛋白质。迄今为止，在哺乳动物中已经分离鉴定的Smad蛋白有9种［6］，用Smad19表示，按功能可分成3类：受体活化Smad（RSmads）、共配偶体Smad（CoSmad）和抑制性Smad（ISmads）。活化的TGFβ1受体磷酸化激活受体活化型Smads（Smad2，3）蛋白，吸引共配偶体型Smad4形成低聚体复合物，转移到细胞核内，调节转录活动，同时可以激活核内ECM成分如各型胶原、纤维