高效液相色谱法测定不同产地宁夏枸杞中芦丁和绿原酸的含量

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1、高效液相色谱法测定不同产地宁夏枸杞中芦丁和绿原酸的含量作者：张自萍，廖国玲，史晓文【摘要】目的建立反相高效液相色谱法同时测定宁夏枸杞中芦丁和绿原酸含量的方法。方法色谱分析条件Shim-packVPODS色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈水乙酸（5∶94.5∶0.5）为流动相A，乙腈∶水∶乙酸（70∶29.5∶0.5）为流动相B，采用梯度洗脱，流速0.5ml·min-1，检测波长342nm，柱温30℃。结果绿原酸和芦丁线性范围均为10～100μg·ml-1（相关系数分别为r＝0.9995和r=0

2、.9998），平均回收率（n＝5）分别为98.6%，99.0%；不同产地、不同年份宁夏枸杞样品中芦丁和绿原酸含量存在差异。结论该方法重现性好，适用于同时测定枸杞中芦丁和绿原酸的含量。【关键词】宁夏枸杞；黄酮类化合物；高效液相色谱法；芦丁；绿原酸　　　Abstract：ObjectiveTodevelopanRPHPLCmethodultaneousdeterminationofchlorogenicacidandrutininLyciumbarbarumL.fromdifferenthabitats.Metho

3、dsTheseparationedonaShim-packVPODS250mm×4.6mm（5μm）,acetonitrile/obilephaseAandacetonitrile/obilephaseBl·min-1，thedetectionandthetemperaturel-1(r＝0.9995andr＝0.9998respectively),theaveragerecoveriesbarbarumL.fromdifferenthabitatsethodisrapidandreproducible，the

4、methodcanbeusedtodeterminechlorogenicacidandrutininLyciumbarbarumL.fromdifferenthabitats.　　KeybarbarumL.;Flavonoids;HPLC;Rutin;Chlorogenicacid　　宁夏枸杞LyciumbarbarumL.是我国传统名贵药材，具有增强免疫力、抗氧化、抗肿瘤等多方面的药理作用［1］。黄酮类化合物是其有效成分之一，具有明显的抗氧化作用［2，3］。张颖等［4］采用分光光度法测定了不同产地宁夏枸杞总黄

5、酮含量，钱建亚等［5］报道北方枸杞LyciumchineseMill中含有芦丁和绿原酸等黄酮类化合物，但宁夏枸杞中绿原酸和芦丁含量的测定尚未见报道。本研究建立了反相高效液相色谱法同时测定宁夏枸杞中芦丁和绿原酸含量的方法，并用建立的分析方法，测定了不同产地、不同年份的宁夏枸杞中芦丁和绿原酸的含量，为建立宁夏枸杞质量标准提供理论依据。　　1器材　　仪器：CBM20A高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD20A检测器，二元梯度泵，LCSolution色谱工作站，MilliQA10型纯水仪（MILLIPORE），

6、KQ500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。主要试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，其它为分析纯。绿原酸、芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所。　　本研究选择宁夏枸杞“宁杞Ⅰ号”2004，2005年夏季盛果期果实为材料，为尽可能减小田间管理水平对枸杞品质的影响，在采样时尽量选择枸杞树龄、植株密度、水肥条件、枝条修剪水平和成熟度一致的样品，所有枸杞样品均由宁夏农科院枸杞研究所鉴定，枸杞样品来源见表1。　　2方法与结果　　2.1色谱分析条件通过对色谱柱、波长、流动相、流速、洗脱方式的选择及优化确定了枸杞黄酮类化合物

7、的色谱分析条件。色谱柱：岛津VPODS250mm×4.6mm（5μm）；流动相A∶乙腈∶水∶乙酸（5∶94.5∶0.5）；流动相B：乙腈：水∶乙酸（70∶29.5∶0.5）；梯度洗脱；流速0.5ml·min-1；检测波长342nm；柱温30℃；进样量5μl。　　2.2供试品制备精密称取过16目筛的枸杞样品2.000g，石油醚回流脱脂，在脱脂后的残渣中加入80%乙醇30ml，60℃超声提取两次，30min/次，过滤合并滤液，40℃减压浓缩。浓缩液经HPD600型大孔树脂，蒸馏水洗脱除去水溶性杂质后，再用50%乙

8、醇洗脱，收集乙醇洗脱液50ml为供试品溶液。色谱分析时，供试品溶液过0.45μm有机系微孔滤膜。　　2.3对照品溶液制备精密称取绿原酸、芦丁对照品2.50mg于25ml容量瓶中，少量甲醇溶解，50%乙醇定容，分别制成100μg·ml-1的绿原酸、芦丁对照品贮备溶液。　　2.4标准曲线绘制分别精密量取100μg·ml-1的绿原酸、芦丁对照品贮备液1.0，2.0，4.0，8.