孤啡肽对大鼠脑缺血损伤后细胞凋亡的影响的论文

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1、孤啡肽对大鼠脑缺血损伤后细胞凋亡的影响的论文孤啡肽对大鼠脑缺血损伤后细胞凋亡的影响【关键词】孤啡肽;再灌注损伤;细胞凋亡;受体,谷氨酸【摘要】目的研究孤啡肽(ofq)对脑缺血损伤后细胞凋亡和谷氨酸受体1(glur1)表达的影响。方法成年健康雄性sprague-daatereceptor(glur)aftercerebralischemicinjuryinrats.methodsfourtyadulthealthymalesprague-dalydividedintosham-operationgroup(n=8),ischem

2、iagroup(n=8),ofq0.1μggroup(n=8),ofq1.0μggroup(n=8),ofq10.0μggroup(n=8).themiddlecerebralarteryocclusionmodelialthreadmethodandinterferedinedbyimmunohistochemicalassay.　　resultsthereoperativegroup.thenumberofneuronalapoptoticcellsandtheexpressionofglurincreasedfolloi

3、cinjury.aftertreatmentberofneuronalapoptoticcellsandtheexpressionofglurincreasedsignificantlythanthoseintheischemicgroup.conclusionofqcouldenhancetheoxideinjuryinducediabyupregulatingtheexpressionofglur.　　[keyate　　业已证实，孤啡肽fq(ofq)及其受体是一种内源性阿片肽类-受体系统，广泛存在于中枢神经系统和外周组织[

4、1-4]，该系统能抑制细胞电活动和谷氨酸、内啡肽等递质的释放，并且有利尿、抗应激等作用。.谷氨酸、内啡肽等在脑缺血中发挥着重要作用，因而ofq在脑缺血中也可能起着重要的作用。armstead[5]报道，ofq参与脑血液循环的调节，但是否影响脑梗死尚未见相关报道。由于谷氨酸为脑内主要兴奋性氨基酸(eaa)的一种，能通过谷氨酸受体1(glur1)，产生兴奋性毒性作用。生理状态下谷氨酸合成、分解、摄取和重吸收是一个动态平衡的过程，这种动态平衡一旦遭到破坏，引起的兴奋毒性就可能导致神经细胞的凋亡或坏死，造成广泛的脑组织病理性损害。本实

5、验旨在研究ofq对脑缺血再灌注后glur1表达的影响，探讨其在脑缺血损伤中的作用。现将结果报告如下。　　1材料和方法　　1.1实验动物　　雄性sprague-dacao)模型，2h后抽出尼龙线，使缺血区再灌注。手术结束后，动物置于25℃环境下苏醒，自由饮食。假手术组手术步骤同上，但栓塞线不插入到阻塞部位。实验过程中监测脑电和肛温，室内温度保持25℃，手术台周围用白炽灯控制动物肛温在37~38℃。　　1.3干预措施　　缺血30min，应用脑立体定位仪,在大鼠右侧脑室内埋入微量注射套管并固定，埋管位置为a0.5mm，r/l1mm，

6、h4.2mm。埋管30min后ofq0.1μg组、ofq1.0μg组、ofq10.0μg组分别经内套管一次性注射ofq(美国rdi公司)10μl，浓度分别为0.01、0.10、1.00g/l。　　1.4原位tunel染色　　大鼠脑缺血再灌注24h，应用40g/l水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉，左心室插管，经主动脉先后灌注生理盐水和40g/l多聚甲醛，取脑，放入含50g/l蔗糖的40g/l多聚甲醛固定液中4℃过夜;再置入含300g/l蔗糖-40g/l多聚甲醛的固定液中至组织块沉底。用德国徕卡冷冻切片机行冠状位冷冻切片，

7、切片厚度30μm，每隔15张切片取1张，贴在经多聚赖氨酸处理过的载玻片上晾干。按照dendendtunel细胞凋亡检测试剂盒(santacruz公司)说明书进行操作，同时设立阳性对照(加1mg/ldnaseⅰ)和阴性对照(不加探针)。荧光显微镜下观察有无发出异硫氰基荧光素(fitc)黄绿色荧光的凋亡细胞。每只大鼠取4张切片，高倍镜下(400倍)在皮质和纹状体区的缺血周边区随机各取4个视野计数凋亡细胞，取其均数。　　1.5免疫组化染色　　兔抗鼠glur抗体购自santacruz公司，sabc免疫组化试剂盒、dab染液购于武汉博士

8、德生物公司。严格按说明书染色步骤操作，光镜下观察胞浆或胞核有棕色颗粒者为阳性细胞。部分切片不加一抗，使用0.1mol/lpbs代替，不出现阳性反应。每只大鼠取4张切片，在400倍光镜下随机观察皮质和纹状体区的缺血周边区各4个视野，leicaqmol/l，其主要存在于谷氨酸能神