孤啡肽对大鼠脑缺血损伤后细胞凋亡的影响

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1、孤啡肽对大鼠脑缺血损伤后细胞凋亡的影响【关键词】孤啡肽;再灌注损伤;细胞凋亡;受体,谷氨酸　[ABSTRACT]ObjectiveTostudytheeffectoforphaninFQ(OFQ)ontheexpressionofglutamatereceptor(GluR)aftercerebralischemicinjuryinrats.MethodsFourtyadulthealthymaleSprague-Dalydividedintosham-operationgroup(n=8),ischem

2、iagroup(n=8),OFQ0.1μggroup(n=8),OFQ1.0μggroup(n=8),OFQ10.0μggroup(n=8).Themiddlecerebralarteryocclusionmodelialthreadmethodandinterferedinedbyimmunohistochemicalassay.　　ResultsThereoperativegroup.ThenumberofneuronalapoptoticcellsandtheexpressionofGluRincr

3、easedfolloicinjury.AftertreatmentberofneuronalapoptoticcellsandtheexpressionofGluRincreasedsignificantlythanthoseintheischemicgroup.ConclusionOFQcouldenhancetheoxideinjuryinducediabyupregulatingtheexpressionofGluR.　　[KEYSTEAD[5]报道，OFQ参与脑血液循环的调节，但是否影响脑梗死尚未

4、见相关报道。由于谷氨酸为脑内主要兴奋性氨基酸(EAA)的一种，能通过谷氨酸受体1(GluR1)，产生兴奋性毒性作用。生理状态下谷氨酸合成、分解、摄取和重吸收是一个动态平衡的过程，这种动态平衡一旦遭到破坏，引起的兴奋毒性就可能导致神经细胞的凋亡或坏死，造成广泛的脑组织病理性损害。本实验旨在研究OFQ对脑缺血再灌注后GluR1表达的影响，探讨其在脑缺血损伤中的作用。现将结果报告如下。　　1材料和方法　　1.1实验动物　　雄性Sprague-Dain，应用脑立体定位仪,在大鼠右侧脑室内埋入微量注射套管并固定，埋

5、管位置为A0.5mm，R/L1mm，H4.2mm。埋管30min后OFQ0.1μg组、OFQ1.0μg组、OFQ10.0μg组分别经内套管一次性注射OFQ(美国RDI公司)10μL，浓度分别为0.01、0.10、1.00g/L。　　1.4原位TUNEL染色　　大鼠脑缺血再灌注24h，应用40g/L水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉，左心室插管，经主动脉先后灌注生理盐水和40g/L多聚甲醛，取脑，放入含50g/L蔗糖的40g/L多聚甲醛固定液中4℃过夜;再置入含300g/L蔗糖-40g/L多聚甲醛的固

6、定液中至组织块沉底。用德国徕卡冷冻切片机行冠状位冷冻切片，切片厚度30μm，每隔15张切片取1张，贴在经多聚赖氨酸处理过的载玻片上晾干。按照DendEndTUNEL细胞凋亡检测试剂盒(SantaCruz公司)说明书进行操作，同时设立阳性对照(加1mg/LDNaseⅠ)和阴性对照(不加探针)。荧光显微镜下观察有无发出异硫氰基荧光素(FITC)黄绿色荧光的凋亡细胞。每只大鼠取4张切片，高倍镜下(400倍)在皮质和纹状体区的缺血周边区随机各取4个视野计数凋亡细胞，取其均数。　　1.5免疫组化染色　　兔抗鼠Glu

7、R抗体购自SantaCruz公司，SABC免疫组化试剂盒、DAB染液购于武汉博士德生物公司。严格按说明书染色步骤操作，光镜下观察胞浆或胞核有棕色颗粒者为阳性细胞。部分切片不加一抗，使用0.1mol/LPBS代替，不出现阳性反应。每只大鼠取4张切片，在400倍光镜下随机观察皮质和纹状体区的缺血周边区各4个视野，LEICAQmol/L，其主要存在于谷氨酸能神经末梢囊泡内，末梢去极化兴奋时，通过Ca2+依赖方式释放谷氨酸，释放的谷氨酸作用于其受体。生理情况下，细胞外谷氨酸浓度约为0.6μmol/L，但病理情况下

8、，当细胞外谷氨酸浓度达到2~5μmol/L时，就能引起神经元的损伤[8]。柳耀泉等[9]报道，脑缺血早期经侧脑室注射痛敏孤啡肽FQ可使感觉诱发电位波幅降低、恢复时间延长、脑梗死体积增大。因此，对局灶性脑缺血大鼠，拮抗兴奋性氨基酸性毒性以及抑制其受体活性，对脑缺血损伤具有防治作用。【