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1、8基因-251A／T多态性与急性胰腺炎的关系426福建医科大学2007年9月第4l卷第5期白细胞介素一8基因一251A/T多态性与急性胰腺炎的关系李赘,黄鹤光,陈先强,周一农摘要:目的?探讨白细胞介素一8(IL-8)启动子区域-251基因多态性及血浆IL-8水平与急性胰腺炎合并全身炎症反应综合征(SIRS)的关系.方法应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析方法(PCR—RFLP)测定71例急性胰腺炎(AP)患者[轻型(MAP)36例,重型(SAP)35例]IL一8-251A/T的基因多态性,酶联免疫吸附法检测血浆IL-8水平.结果IL广8—251A/
2、A+A/T基因型出现的频率在SAP组和MAP组存在差异.AP组和对照组差别无统计学意义;AA基因型AP组和对照组差别有统计学意义;各基因型出现频率在AP是否合并SIRS组差别无统计学意义.各组血浆IL一8水平差别有统计学意义.IL-8—251基因多态性与血浆IL-8水平有相关性.结论IL-8—251基因多态性可能是AP病情进展的危险因素;IL-8—251基因多态性可影响血浆IL-8水平,血浆IL-8水平与AP病情程度有关.关键词:白细胞介素8;基因;多态性,限制性片段长度;急性病;胰腺炎中图分类号:R576;R392.12文献标识码:A文章编号:1672
3、-4194(2007)05—0426—03急性胰腺炎(AP)尤其是重症急性胰腺炎(SAP)在发生发展过程中常合并全身炎性反应综合征(SIRS)及多器官功能障碍综合征(MODS),并导致死亡.一般认为促炎细胞因子在发病过程中发挥重要作用,自细胞介素一8(IL-8)在AP时表达明显增加,有合并SIRS的尤为明显L1],与疾病严重程度相关.笔者探讨IL一8—251A/T基因多态性及IL一8水平与AP的关系.1对象与方法1.1对象选择2005年8月～2007年1月的住院患者71例,男性33例,女性38例,年龄(46.3±14.3)岁(2O～75岁).其中轻型(M
4、AP)36例,SAP35例;合并SIRS组34例,无SIRS组37例.在SAP组中,I型15例,Ⅱ型1O例.AP诊断标准参照文献[2];SAP诊断依据APACHEⅡ评分≥8分,BalthazarCT评分≥4分嘲;SIRS诊断依据文献[4].为使人选者在基因学上具有一致性和可比性,所有研究对象都是汉族,且排除以下情况:(1)年龄>75岁;(2)白细胞d0.4X10.L_.;(3)正在应用免疫抑制剂;(4)慢性胰腺炎.随机选择7O例健康体检者作为对照组,男性39例,女性31例,年龄(48.9±l5.1)岁(28～85岁).各组问性别及年龄比较差别元统计
5、学意义.1.2方法1.2.1测定血浆IL一8取外周血后,EDTA抗凝,收稿日期:2007—03—15修回日期:2007—07—19基金项目:福建省卫生厅医学创新科研资助项目(2003一CX一20)作者单位:福建医科大学附属协和医院普外科,福州350001作者简介:李赞(1977~),男,医师,医学硕士,现在新疆昌吉州人民医院外三科工作离心,置于一7O℃冰箱(Fax2100,美国Stat公司)保存以待统一测定.应用酶联试剂盒(深圳晶美生物制品公司),酶标仪(EL一3l1S型,美国BIO—TEK公司)测定IL-8.1.2.2提取基因组DNA取外周静脉EDTA
6、抗凝血3mL,红细胞裂解液收集白细胞,酚/氯仿法提取基因组DNA,用适量的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐与乙二胺四乙酸二钠的配制液(TE)或双蒸水溶解,置于一7O.C冰箱保存.1.2.3基检测因多态性应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)技术检测,先用PCR技术扩增IL一8启动子上游108bp片段,引物设计参照文献[53:上游P1:5'TTCTAACACCTGCCACTCTAG3'下游P2:5'CTGAAGCTCCACAATTTGGTG3'引物由上海生工生物工程有限公司合成.反应在PCR仪(PTC一200,美国MJResearch公司)上进行
7、,反应体系25L,TaqDNA聚合酶2U,dNTP200肚moL/L,引物P1,P2浓度20pmoL/L,模板DNA5O～100ng,反应条件为94℃预变性4min一94℃3Os一6O℃3Os一72℃30S,循环35次,72℃延伸7min(美国TaKaRa公司).PCR产物经2琼脂糖电泳,溴化已啶染色,紫外透射仪观察,扩增成功DNA片段(108bp).PCR产物取1OL,加1OXbuffer2L,加限制性内切酶Mfel5U(英国BioLabs公司),在37℃水浴消化2～16h,用3%琼脂糖电泳,溴化已啶染色,紫外透射仪观察分析酶切产物,IL一8基因-25
8、1位点有3种基因型,如为TT纯合子,则1条DNA片段长度为108bp,AT杂合子
