中草药对动物大肠杆菌体外抑菌试验步骤

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1、中草药对动物大肠杆菌体外抑菌试验步骤选用27种不同的中草药制剂（煎剂、挥发油、蒸馏液），以平板稀释法和纸片法对同一株肉鸡源的大肠杆菌进行体外抑菌试验。其试验结果表明，有14种中药对此株大肠杆菌有不同程度的抑制作用。试验还表明中药制剂的配方工艺不同，其抑菌的效果亦有不同。  　一、实验用材料方法 　　1 材料 　　（1）试验菌株肉鸡源大肠杆菌（安徽技术师范学院动物科学系预防兽医教研室提供）。 　　（2）培养基普通营养琼脂、麦康凯琼脂。按常规方法制备。 　　（3）单味中药金银花、防风、板蓝根、白芷、连翘、杏仁、射干、辛夷、贯众、羌活、荆芥、藿香，中草药的煎

2、制与蒸馏由安徽技术师范学院中药实验室完成，每毫升相当于1g生药。　　（4）复方中药银射煎液、麻杏射防煎液、羌藿连防煎液、辛芷荆煎液、辛芷荆蒸馏液、银射蒸馏液、羌藿连防蒸馏液、麻杏射防蒸馏液，每毫升相当于1g生药。 　　2。方法 　　（1）大肠杆菌对中药（单味、复方）敏感性的体外试验-平板稀释法。 　　取1ml原药液为第1支试管；在第2支试管中分别加入0.5ml原药液和0.5ml生理盐水以倍比稀释法稀释至第4支试管；第5支试管为无药对照管。先分别把药液倒入无菌的平皿中，后倾入60℃无菌普通营养琼脂或麦康凯琼脂，并迅速混合均匀，制成平板。以无菌的涂抪棒蘸取试验

3、用细菌均匀涂抪于平板表面，置37℃培养箱内培养24h，后观察结果。 　　（2）在第1支试管加入8ml原药液，第2支试管加入4ml原药液，第3支试管加入2ml原药液，第4支试管加入1ml原药液，第5支试管为无药对照管，在第2支试管至第5支试管中分别加入4ml、6ml、7ml及8ml生理盐水；按照1211项方法制成平板，涂抪细菌后置37℃的培养箱中培养24h后，观察并记录结果。 　　（3）大肠杆菌对中药（单味、复方）的敏感性试验——纸片法 将筛选出的对大肠杆菌有明显抑制作用的复方、单味中药制剂分别制成药敏纸片，测定抑菌圈的大小。方法：取直径为0.6cm的

4、灭菌滤纸片在原药液中浸泡40min，取出备用。在已制备好的平板中，无菌操作放置药敏纸片，每种药物贴6片，然后将平板置37℃温箱中培养24h后测定抑菌圈的大小，取其平均值。 　　二、实验结果 　　1。平板法抑菌试验结果    在低浓度下，银射煎液、麻杏射防煎液、新防风挥发油、羌藿连防煎煮液、辛芷荆煎煮液、银花蒸馏液、板蓝根煎煮液及贯众煎煮液都有不同程度的抑菌作用；而连翘水煎液、辛夷煎煮液、射干煎煮液、羌藿煎煮液、藿香煎煮液、连翘挥发油在高浓度下对大肠杆菌的生长才有明显的抑制作用。在低浓度下无抑菌作用的中药有银花挥发油、辛芷荆蒸馏液、银射蒸馏液、羌藿连防蒸馏

5、液、白芷挥发油、连翘水煎液、杏仁煎煮液。在高浓度下无抑菌作用的有麻杏射防蒸馏液、荆芥煎煮液、白芷煎煮液。 　　2。纸片法测定中草药对大肠杆菌生长的抑制作用    结果见表1。从表1可以看出，单味中草药银花蒸馏液、贯众煎煮液、连翘水煎液、射干煎煮液、藿香煎煮液均有较强的抑菌作用，而防风挥发油煎煮液、辛夷煎煮液、板蓝根煎煮液、羌活煎煮液的抑菌作用次之。4复方辛芷荆煎煮液、羌藿连防煎煮液、麻杏射防煎煮液及银射煎煮液都具有抑菌作用。 　　三、小结与讨论 　　1。通过平板稀释法所筛选出的14种中草药（单味、复方）对大肠杆菌都具有不同程度的抑制作用。因此，当用此1

6、4种中药进行纸片法药敏试验时都有抑菌圈出现，之所以未对平板稀释法的结果进行详尽阐述，是因为其结果不易量化，评定时往往带有主观性，易产生误差而影响结果的准确性。在此，笔者只把平板稀释法当作定性试验来筛选有抑菌作用的中草药，而把纸片法当作定量试验来具体判定中草药抑菌作用的大小。 　　从结果可以看出，单味中药银花蒸馏液、贯众、连翘、射干、藿香对大肠杆菌有明显的抑制作用，而其它单味中药对大肠杆菌的抑制作用较弱。4复方中药对大肠杆菌具有明显的抑制作用，说明药物配伍适当可提高其抑菌效果。复方比单味中药的抑菌效果好，一方面与抑菌药物在复方中的比例有关，另一方面，药物在平板

7、上涂布大肠杆菌的数量和方式也有影响，这与刘玉庆等报道的结果是一致的。 　　2。中草药的抑菌浓度是抗生素的1000倍级，这在中草药目前的炮制和使用情况下难以达到如此高的体内浓度，单味中草药难以替代抗生素，应在中草药和抗生素联合使用上进行研究，可以减少耐药性和抗生素残留。   　　3。本次试验所用的中药成分有的为挥发油类，故在制成纸片或制成平板时药物成分会挥发一部分，导致其浓度有所降低，加之药敏试纸为本实验室自己制作，薄厚可能会不太均匀，对试验结果可能会造成一定的影响，加大误差。同时，本次试验所用的药品较少，细菌种类单一。