8种中草药对大肠杆菌的体外抑菌试验_向双云.pdf

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1、2016(05下):167－1698种中草药对大肠杆菌的体外抑菌试验向双云，周珍辉，李玉冰，张浩(北京农业职业学院畜牧兽医系，北京102442)+中图分类号:S853．75;S852．612文献标识码:B文章编号:1004－7034(2016)05－0167－03关键词:大肠杆菌;中草药;体外;抑菌试验;最小抑菌浓度摘要:为了寻找抗生素的替代品，试验采用琼脂平板打孔法、牛津杯法和试管两倍稀释法检测了黄芩、黄连、黄柏、鱼腥草、穿心莲、五味子、连翘、艾草8种中草药对大肠杆菌的抑制作用。结果表明:黄连、鱼腥草、五味子、艾草对大肠杆菌的抑菌效果为高度敏感，五味子和艾草的最小抑菌浓

2、度(MIC)为62．5mg/mL，黄连和鱼腥草的MIC为125mg/mL，大肠杆菌对其他4种中草药均不敏感。说明部分中草药对大肠杆菌具有一定的抗菌作用。DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2016.0902随着规模化、集约化养殖业的发展，大肠杆菌病工作台(型号为VS－1300L)，购自苏净安泰空气技已成为危害养殖业的主要传染病之一。由于大肠杆术有限公司;电子天平(型号为SL502N)，购自上海菌的血清型较多，用疫苗免疫达不到很好的效果。因羽通仪器仪表厂。此，当前在实践生产中养殖户通常采用在饲料中添加2方法抗生素对该病进行预防。但近年来，我国一些饲料厂2

3、．1供试中药的处理家和养殖户片面追求经济利益，长期不合理使用抗生称取已过200目筛的中药50g，置于烧杯中，添素，导致细菌耐药性增加，抗生素在动物性食品中的加200mL蒸馏水，浸泡30min，然后煎煮至沸腾，煮残留量增高，直接威胁到消费者的健康，严重影响了沸后文火煎煮30min，用4层纱布过滤药液。取药渣养殖业的可持续发展。中草药具有抗生素所不具备加100mL蒸馏水，煮沸后再文火煎煮30min，过滤药的许多优点，长期使用较少产生耐药性，不易出现残液。合并两次药液，用文火浓缩至50mL，使其终浓留、抗药性及毒副作用，具有安全性和可靠性，是抗生度至1g/mL，2500r/mi

4、n离心15min，取上清液，素无可比拟的。2014年11月份至2015年5月份，课121℃灭菌15min，放入4℃冰箱，备用。题组在北京农业职业学院微生物实验室进行了8种中2．2试验菌的制备草药对大肠杆菌的体外抑菌试验，以了解其抗菌效果。将标准菌接种于新鲜肉汤培养基中，置37℃恒1材料温培养箱中培养16～18h。将试验菌肉汤培养物稀1．1试验菌种释1000倍后置4℃冰箱中保存，备用。大肠杆菌K88，购自中国兽医药品监察所。2．3琼脂平板打孔法1．2试验药材先制备营养琼脂平板，用移液器吸取0．1mL菌黄芩、黄连、黄柏、鱼腥草、穿心莲、五味子、连翘、液加入平皿中，然后用涂布器

5、将菌液均匀涂布在营养艾草，均由北京农业职业学院中兽医实验室提供。琼脂平板上;再用直径为0．6cm的打孔器在营养琼1．3主要试剂脂平板上等距离打6个孔，孔径大小、深度保持均匀;营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、麦康凯琼脂将打好的孔在酒精灯火焰上略微加热，让底部的培养培养基，均购自北京奥博星生物技术责任有限公司。基稍微熔化后重新凝固封孔，以防止加入的药液从底1．4主要仪器部漏出，影响试验结果。将供试药液0．2mL加于孔生化培养箱(型号为LＲH－150)，购自上海一恒中，每种药液做3个重复平皿;置于4℃冰箱中作用科技有限公司;高压蒸气灭菌器(型号为Q－LS－1h后，再在37℃恒温

6、箱中培养24h，观察结果，测量18S)，购自上海博迅实业有限公司医疗设备厂;超净抑菌圈的直径，求出每种药液3个平皿抑菌圈直径的平均值。结果判定标准:抑菌圈直径小于10mm为耐药(–)，10～15mm为中度敏感(+)，15mm以上收稿日期:2015－10－15;修回日期:2015－11－03［1］基金项目:院级课题项目(XY－YF－14－16)为高度敏感(++)。作者简介:向双云(1977－)，女，讲师，硕士，主要从事动物2．4牛津杯法微生物教学工作，103662549@qq．com．在制备好的营养琼脂平板上加入0．1mL菌液，·167·№．05，2016用涂布器将菌液涂布

7、均匀;在培养基表面均匀垂直摆表28种中草药牛津杯法测定结果放4个牛津杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙;抑菌圈抑菌圈中药敏感度中药敏感度在杯中加入不同药液，每种药液做3个重复平皿;置直径/mm直径/mm于4℃冰箱中作用1h后，再在37℃恒温箱中培养黄芩1Ｒ穿心莲0Ｒ24h，观察结果。以牛津杯周围没有肉眼可见细菌生黄连16S五味子18S黄柏0Ｒ连翘6I长区域为抑菌圈，用游标卡尺测量抑菌圈的直径，求鱼腥草15I艾草20S出每种药液3个平皿抑菌圈直径的平均值。根据抑注:Ｒ表示耐药，I表示中度敏感，S表示高度敏感。菌圈直径的平均值判