布鲁氏菌病lamp检测方法之建立及双基因共表达分子疫苗研究

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1、布鲁氏菌病LAMP检测方法之建立及双基因共表达分子疫苗研究第一章绪论1.1布鲁氏菌病概况布鲁氏菌为一种球杆状革兰氏阴性菌，0.5～0.70.6～1.5μm，多单在，很少短链或成堆状，不形成芽孢和荚膜，无鞭毛不运动。姬姆萨染色呈紫色；经柯兹罗夫斯基或改良Ziehl-Neelsen等鉴别染色法染成红色，可与其它细菌相区别。本菌专性需氧，最适生长温度为37℃，pH值为6.6～7.4。《伯杰氏系统细菌学手册》将布鲁氏菌归属为古生菌域，变形杆菌门，根瘤菌目，布鲁氏菌科，布鲁氏菌属。传统分类将根据抗原性和宿主的不同，将布氏杆菌分为6种19个生物型，即：马耳他布鲁氏菌，也叫羊

2、种布鲁氏菌（Brucellamelitensis）；流产布鲁氏菌，也叫牛种布鲁氏菌（Br.abortus）；猪种布鲁氏菌（Br.suis）；绵羊布鲁氏菌，也叫绵羊附睾布鲁氏菌（Br.ovis）；沙林鼠布鲁氏菌（Br.neotomae）和犬布鲁氏菌（Br.canis）。其中Br.melitensis有3个生物型，Br.abortus有8个生物型，Br.suis有5个生物型，其余三个种各一个生物型（Atlurietal.,2011;Corbel1997）。近年来，英国和美国科学家还在海洋哺乳动物体内分离到鲸种布鲁氏菌（Br.ceti）和鳍足种布鲁氏菌（Br.pinnipe

3、dialis），德国和捷克科学家又发现了田鼠种布鲁氏菌（Br.microti），扩大了本菌的生态范围（Dagleishetal.,2008;Fosteretal.,2007;Scholzetal.,2008）。感染人的种有牛、羊、猪、犬及海洋哺乳动物种。布鲁氏菌有光滑型（S）和粗糙型（R）两种，除绵羊和犬种布鲁氏菌是天然R型外，其它种布鲁氏菌均为光滑型，但在人工培养后，易发生S-R变异；R型细菌O抗原丢失，非特异性表面抗原R-LPS暴露出来，使得毒力减弱。S型布鲁氏菌主要抗原包括M（马耳他型）和A（流产型）；Br.abortus以A抗原为主，A与M之比为20:1，Br

4、.melitensis则相反，Br.suisA与M之比为2:1。本菌对外界环境抵抗力较强，在土壤和水中可存活1～4个月，乳、肉食品中约2个月，粪尿中45d，流产胎儿中至少75d，子宫渗出物中200d。但对湿热和消毒剂抵抗力不强，60℃加热30min或70℃5min即杀死，煮沸立即死亡；用2％石炭酸、来苏尔、烧碱溶液可于1h内杀死本菌；5％新鲜石灰乳2h、1～2％福尔马林3h，0.1%消毒净5min可将其杀死（陈溥言，2001）。1.1.2流行状况与危害布鲁氏菌宿主范围较广，可感染60多种家畜、野生动物和海洋哺乳动物，其中以牛、羊、猪最为易感。本病可经呼吸、消化、生殖系

5、统粘膜、结膜以及损伤甚至未损伤的完整皮肤黏膜、交媾或吸血昆虫等多种途径传播。感染后主要导致动物生殖系统损害，引起怀孕母畜胎膜发炎，导致不孕、流产、死胎等，严重危害养殖业的发展。人类主要由于接触感染动物的乳、肉、皮毛及流产物等被感染，以畜牧养殖、加工人员及布鲁氏菌病专业工为高危人群。感染后可造成骨关节、神经系统、生殖系统和免疫系统等损害，并长期常伴发菌血症或毒血症。1887年Bruce首次从英国驻军死亡士兵脾脏中分离到布鲁氏菌，此后人们在美国等许多国家逐渐分离出各种型的布鲁氏菌。现在，全世界除挪威、瑞典、芬兰、丹麦、瑞士、捷克斯洛伐克、罗马尼亚、英国、荷兰、日本、奥地利

6、、塞普路斯、保加利亚和冰岛14个国家和地区宣布无布病外，已有170多个国家和地区报告有人、畜该病疫情发生，其中较严重的国家集中分布在亚洲、非洲和南美洲（Alshaolan,2002;Bikasetal.,2003;Rajesh,2003）。据统计资料显示，全世界每年因布鲁氏菌病造成的经济损失近30亿美元，仅在拉丁美洲就造成6亿美元损失，美国在90代平均每年因布病造成的损失可达1.5亿美元（BuschParker,1972;Sreevatsanetal.,2000），目前全世界1/6～1/5的人受到布病威胁，现有布病患者约500～600万人，年新发病人数约50万（尚德秋

7、，2004）。我国现有布病患者30～50万，约有1200多个县为布病疫区县。据报告，我国从1996～2005年，10年间人间布病发病率上升了近17倍。2006年，全国共报告发病19013例，远远超过历史上发病人数最多的1963年的12097例；2008年，全国共报告布病27767例，较2007年的19721例上升了40.8%（赵永利等，2008；史新涛等，2010）。而动物疫情自20世纪80年代下降到历史最低点之后，90年代开始回升，现已远远高于历史上感染水平最高的上世纪60年代（甄清，2009）。分析布病疫情反弹的原因主要与流通环节检疫技术落后、免