红树植物卤蕨内生真菌penicillium sp. 0935030中的抗菌活性成分研究论文

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1、红树植物卤蕨内生真菌Penicilliumsp.0935030中的抗菌活性成分研究论文崔海滨梅文莉缪承杜林海鹏洪葵戴好富【摘要】为研究红树林植物卤蕨(Acrostichumaureurm)内生真菌Penicilliumsp.0935030发酵物中的抗菌活性成分，采用活性追踪的方法，用多种色谱技术对化合物进行分离纯化，通过理化性质和光谱数据鉴定出7个化合物，分别为：环(脯氨酸苏氨酸)(1)，环(脯氨酸酪氨酸)(2)，1呋喃基1，2乙二醇(3).freelthefermentationbrothofendophyticfungusPenicilliumsp.09

2、35030frommangroveplantAcrostichumaureurm.Theseparationprocedurenchromatography,andtheirstructuresannitol(5),uridine(6),andliquiritigenin(7)byphysicochemicalandspectraldata.Allpoundsthisfungusforthefirsttime.Antibacterialactivitiesofallthepoundsethod,.freelethicillinresistantStaphylococ

3、cusaureus.KEYRSA)，至今MRSA已成为全球医院感染的重要病原菌之一。MRSA具有广谱耐药性，其所致感染的治疗是临床十分棘手的难题，寻找有效治疗MRSA的新抗生素已经成为当今医药界的重要任务［4］。本研究组在对红树植物共附生微生物的培养物进行生物活性筛选过程中，发现红树林植物卤蕨(Acrostichumaureurm)内生真菌Penicilliumsp.0935030的发酵液显示出抗MRSA活性。为了寻找其中的抗菌活性成分，以MRSA、金葡菌和白念珠菌为模型，在活性筛选指导下，从该发酵液的乙酸乙酯萃取物中分离得到7个化合物，经MS、NMR、1H1HC

4、OSY、HMQC和HMBC等鉴定其结构分别为：环(脯氨酸苏氨酸)(1)、环(脯氨酸酪氨酸)(2)、1呋喃基1，2乙二醇(3)、(3β，4β，22β)12烯3，22，23三羟基齐墩果烷(4)、甘露醇(5)、尿苷(6)和甘草素(7)。以上化合物均为首次从该真菌中分离得到，其中化合物1、2和7具有明显抗MRSA和金葡菌的活性(Fig.1)。1材料与方法1.1试验试剂和仪器熔点用北京泰克仪器有限公司生产的X5型显微熔点仪测定(未校正)。旋光在JASCO20C数字旋光仪上测定；MS用VGAutospec3000型质谱仪测定；NMR用Brukerav4

5、00超导核磁仪测定，以TMS为内标；薄层层析硅胶和柱层析硅胶均为青岛海洋化工厂产品；SephadexLH20为Merck公司产品；GJ100BE发酵罐(江苏镇江生物仪器公司)；硫酸卡那霉素(上海生工有限公司)，氟康唑(贵州科伦药业有限公司，批号A05031404)，其它试剂均为分析纯。供试菌株MRSAATCC9551由英国HeriotRSA和金葡菌采用牛肉膏蛋白胨培养基［5］：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂20g，定容至1L，pH7.0～7.2，121℃灭菌20min；白念珠菌采用YPD培养基［6］：葡萄糖20g，胰蛋白胨20g，酵母粉10g，琼脂

6、20g，定容至1L，pH7.0，121℃灭菌20min。1.2菌株的分离与培养(1)菌株菌株093503分离自海南文昌清澜港红树林植物卤蕨(Acrostichumaureurm)的根，植物样品由中国热带农业科学院热带生物技术研究所代正福副研究员鉴定为卤蕨，菌株093503由中国热带农业科学院热带生物技术研究所洪葵教授研究组鉴定为青霉属，初筛具有抗MRSA活性。菌种保存于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。(2)培养改良Martin培养基［5］葡萄糖10g，蛋白胨5g，KH2PO41g，MgSO4·7H2O0.5g，琼脂20g，50%陈海水定容至1L，pH7.2，12

7、1℃灭菌30min。黄豆粉发酵培养基［7］可溶性淀粉20g，蛋白胨2g，酵母粉5g，黄豆粉15g，NaCl4g，CaCO34g，50%陈海水定容至1L，pH7.2～7.4，121℃灭菌25min。青霉093503经Martin培养基平板活化，接种于黄豆粉种子培养基中，28℃，180r/min振荡培养3d，按1%接种量接种到70L黄豆粉发酵培养基，发酵罐28℃培养7d。发酵2批，发酵液共140L。1.3活性测试(1)生物活性测试方法［8］将样品配成浓度为10mg/ml的溶液，加样品溶液50μl于直径6mm的灭菌滤纸圆片上，待溶剂挥干后，将已点样的滤纸圆