基于its序列分析铁皮石斛试管苗的亲缘关系

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1、基于ITS序列分析铁皮石斛试管苗的亲缘关系顾慧芬1,庄意丽1,梅其春2(1.上海市中药研究所上海201203;2.复旦大学生命科学学院上海200433)摘要:采用分子系统学方法分析铁皮石斛试管苗及其近缘种的遗传多样性,为准确进行基源鉴定、阐明属内的种间关系及发现新的药用资源提供分子证据。采集三十多种石斛样品分离提取DNA,PCR扩增ITS区及5.8SrDNA完整序列并测序,用Mega3.1软件进行系统学分析。采用邻接法和最大简约法分析铁皮石斛试管苗亲缘关系,对三十多种石斛类植物的ITS区序列进行分析,两种方法得到的系统树基本一致。ITS序列在石斛种间存在

2、极其显著的差异,铁皮石斛与其它各种石斛均有各自特异性的序列位点,树状图显示铁皮石斛试管苗与野生铁皮石斛源于同一物种,而石斛属其它种与这两种遗传关系较远。关键词:铁皮石斛试管苗;ITS序列;系统发育;亲缘关系所属专业:生化与生物技术药物ThePhylogeneticRelationshipsofTissueCultureSeedlingsofDendrobiumcandidumBasedonEvidencesfromITSSequencesGUHui-fen1,ZHUANGYi-1i1,MEIQi-chun2(1.ShanghaiInstituteofCh

3、ineseMateriaMedica,Shanghai201203,China;2.SchoolofLifeSciences,FudanUniversity,Shanghai200433,China)Abstract:MolecularsystematictechniqueswereappliedtorevealthegeneticdiversityofmedicinalplantofDendrobiumcandidumandtheirrelatedspeciesinDendrobium.Theinternaltranscribedspacer(ITS)

4、aswellas5.8SrDNAsequencesofmorethan30samplesofDendrobiumwereamplifiedusingPCRmethodandsequenced.Mega3.1wasusedtoanalyzethegeneticdiversitywithingenus.PhylogeneticrelationshipsamongspeciesinDendrobiumandtissuecultureseedlingsofDendrobiumcandidumasoutgroupwereestimatedbymaximumpars

5、imonyandneighbor—joiningmethodswithMega3.1software,andsimilarITStreeswereobtainedwiththetwomethods.TheresultsofphylogeneticanalysisalsoindicatethatthetissuecultureseedlingsofDendrobiumcandidumhasaclosedrelationshipwithDendrobiumcandidum,whilebothDendrobiumcandidumandtissueculture

6、seedlingsofDendrobiumcandidumarethemostdistanttotheotherspeciesofDendrobium.Keywords:tissuecultureseedlingsofDendrobiumcandidum;ITSsequence;phylogeny;relationship铁皮石斛(DendrobiumcandidumWall.exLindl),为兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw.)多年附生草本,是我国传统名贵中药之一,为石斛之上品,具有润喉消毒、生津益胃、清热养阴等功效。药

7、理研究显示铁皮石斛是一类很有价值的中药类免疫增强剂[1]-[2],临床上也广泛的用于肿瘤病人手术及化疗后的辅助治疗。随着铁皮石斛研究的不断深入,市场对铁皮石斛的需求也不断增大。近年来通过无性繁殖即组织培养培植试管苗,获得了成功,实现了资源的可持续开发和利用。药用植物在采用组织培养等进行繁殖和人们在栽培的过程中,由于改变了其生态环境和人类的干扰,其遗传特性等方面是否会发生变化,也是人们关注的问题之一。随着分子生物技术的迅速发展,DNA分子标记技术在中药鉴定方面的应用已取得了许多进展[3]-[10]。由于rDNA的ITS区域具有较多的碱基变异信息,在长度上具

8、有较好的保守性,因此近10年来被广泛地用于植物属间与种间系统关系的研究。ITS之

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