抑癌基因p53和癌基因mdm2在肾透明细胞癌中的表达及意义

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1、抑癌基因P53和癌基因MDM2在肾透明细胞癌中的表达及意义【关键词】P53；MDM2；肾肿瘤；免疫组织化学【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofantioncogeneP53andcancergeneMDM2proteinsandtheirsignificanceinthepathogenesisandprogressofrenalclearcellcarcinoma.MethodsTodetecttheexpressionofP53andMDM2in60cas

2、esofrenalclearcellcarcinomaand10casesofnormalkidneytissuesmunohistochemicalmethod.ResultsThepositiverateofP53inthetissuesofthe60casesofrenalclearcellcarcinomais41.66%(25/60),muchhigherthan10%(2/20)alkidneytissues.Thereisstatisticalsignificanceinthedisparity(P＜0.

3、05).Furthermore,thepositiverateofMDM2inthetissuesofthe60casesofrenalclearcellcarcinomais53.33%(32/60),higherthan0%(0/20)alkidneytissues.Similarly,thereisstatisticalsignificanceofthedisparity(P＜0.05).Therefore,P53andMDM2arepositivelycorrelatedtoagreatextent(χ２=2.

4、9,P＝0.09).ConclusionBothP53andMDM2participateinthepathogenesisandprogressofrenalclearcellcarcinomaandtheycanbeconsideredasthebiologicalindextoevaluaterenalclearcellcarcinoma.【Keys,immunohistochemistry肾透明细胞癌是人类泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,且发病率呈增高趋势。P53是研究最多的抑癌基因,野生型P53基因(以上的正常肾

5、组织,术后标本经10％福尔马林固定、石蜡包埋。P53、MDM2鼠抗人单克隆抗体，免疫组化EliVision试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。1.2方法常规石蜡包埋切片，制成5μm厚连续切片，黏附于APES处理过的载玻片上，75℃烤片1h，脱蜡，水化，蒸馏水浸泡冲洗，免疫组织化学染色：①高温高压抗原修复；②用PBS液冲洗（5min×3次），3%H2O2室温下孵育10min（以清除过氧化物酶的活性），用PBS液冲洗（2min×3次）；③5%～10%正常山羊血清封闭，室温下孵育10min；④除去血清

6、，分别滴加P53、MDM2一抗工作液，4℃冰箱过夜，PBS液冲洗（5min×3次）；⑤滴加生物素标记的二抗，37℃孵育30min，PBS液冲洗（5min×3次）；⑥滴加SABC复合物，37℃30min，PBS冲洗，（5min×3次）；⑦滴加DAB底物，孵育10min左右显色；⑧流水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化，氨水返蓝。逐级酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。用已知阳性标本作阳性对照；以PBS液代替一抗作阴性对照。1.3结果判定肿瘤细胞核染成棕黄色或棕褐色，胞浆染成浅黄色或棕黄色为阳性反应，染色结果参照文献［3］评分

7、方法，以每张切片在400倍镜下均观察整体染色情况，选择5个有代表性的区域，每个区域计算200个细胞。阳性细胞数计分：阳性数＜5%为0；阳性数＞5%，但≤35%为1；阳性数＞35%，但≤70%为2；阳性数＞70%为3。着色强度计分：不着色为0，弱着色（呈淡棕黄色）为1，强着色（呈明显的棕黄色)为2。阳性分级：以上两项相加，0～1分为（－），2分为（±），3分为（+），4分为（++），5分为（+++）：+～+++计为阳性，－～±计为阴性。1.4统计学处理采用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析，各指标之间相关因素的差异

8、性比较采用χ2检验或连续性校正χ２检验，各指标间的相关性研究采用配对四格χ2检验和一致性检验，P＜0.05为有统计学意义。2结果2.1肾透明细胞癌组织中P53、MDM2的表达见表1。P53、MDM2染色结果:正常细胞偶见P53染色、未见MDM2染色，MDM2、P53在肾透明细胞癌组织呈阳性表达见图1、图2，其表达率显著高于正常肾组