抑癌基因p53和癌基因mdm2在肾透明细胞癌中的

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1、抑癌基因P53和癌基因MDM2在肾透明细胞癌中的【摘要】目的探讨抑癌基因P53蛋白、癌基因MDM2蛋白在肾透明细胞癌中的表达及发生、发展中的意义。方法采用免疫组织化学法检测60例肾透明细胞癌、20例正常肾组织中抑癌基因P53、癌基因MDM2蛋白的表达情况。结果60例肾透明细胞癌组织中P53阳性表达率为41.66%(25／60),显著高于正常肾组织的10%(2／20)，差异有统计学意义(P＜0．05)；60例肾透明细胞癌组织中MDM2阳性表达率为53.33%(32／60),显著高于正常肾组织的0%（0/20），差异有统计学意义(P＜0.05);P53和MDM2二

2、者有一致性（χ２=2.9，P＝0.09）。结论P53与MDM2共同参与肾透明细胞癌的发生、发展,P53与MDM2可作为评价肾透明细胞癌的生物学指标。【关键词】P53；MDM2；肾肿瘤；免疫组织化学【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofantioncogeneP53andcancergeneMDM2proteinsandtheirsignificanceinthepathogenesisandprogressofrenalclearcellcarcinoma.MethodsTodetecttheexpre

3、ssionofP53andMDM2in60casesofrenalclearcellcarcinomaand10casesofnormalkidneytissuesmunohistochemicalmethod.ResultsThepositiverateofP53inthetissuesofthe60casesofrenalclearcellcarcinomais41.66%(25/60),muchhigherthan10%(2/20)alkidneytissues.Thereisstatisticalsignificanceinthedisparity(P

4、＜0.05).Furthermore,thepositiverateofMDM2inthetissuesofthe60casesofrenalclearcellcarcinomais53.33%(32/60),higherthan0%(0/20)alkidneytissues.Similarly,thereisstatisticalsignificanceofthedisparity(P＜0.05).Therefore,P53andMDM2arepositivelycorrelatedtoagreatextent(χ２=2.9,P＝0.09).Conclusi

5、onBothP53andMDM2participateinthepathogenesisandprogressofrenalclearcellcarcinomaandtheycanbeconsideredasthebiologicalindextoevaluaterenalclearcellcarcinoma.【Keys,immunohistochemistry肾透明细胞癌是人类泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,且发病率呈增高趋势。P53是研究最多的抑癌基因,野生型P53基因(以上的正常肾组织,术后标本经10％福尔马林固定、石蜡包埋。P53、MDM2鼠抗人单克隆抗体

6、，免疫组化EliVision试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。1.2方法常规石蜡包埋切片，制成5μm厚连续切片，黏附于APES处理过的载玻片上，75℃烤片1h，脱蜡，水化，蒸馏水浸泡冲洗，免疫组织化学染色：①高温高压抗原修复；②用PBS液冲洗（5min×3次），3%H2O2室温下孵育10min（以清除过氧化物酶的活性），用PBS液冲洗（2min×3次）；③5%～10%正常山羊血清封闭，室温下孵育10min；④除去血清，分别滴加P53、MDM2一抗工作液，4℃冰箱过夜，PBS液冲洗（5min×3次）；⑤滴加生物素标记的二抗，37℃孵育3

7、0min，PBS液冲洗（5min×3次）；⑥滴加SABC复合物，37℃30min，PBS冲洗，（5min×3次）；⑦滴加DAB底物，孵育10min左右显色；⑧流水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化，氨水返蓝。逐级酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。用已知阳性标本作阳性对照；以PBS液代替一抗作阴性对照。1.3结果判定肿瘤细胞核染成棕黄色或棕褐色，胞浆染成浅黄色或棕黄色为阳性反应，染色结果参照文献［3］评分方法，以每张切片在400倍镜下均观察整体染色情况，选择5个有代表性的区域，每个区域计算200个细胞。阳性细胞数计分：阳性数＜5%为0；阳性数＞5%，但≤35%为1

8、；阳性数＞35%，但≤70%为2；阳性